家蚕围食膜因子基因Bm011851在幼虫感染BmNPV过程中的功能研究

发布时间：2022-02-21 05:21

　　家蚕作为鳞翅目昆虫的代表,具有重要的经济价值。家蚕生长发育过程会受到各种病原微生物的威胁,其中家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV）引起的家蚕病毒病占蚕病的70%,对蚕业生产造成了严重影响。围食膜（PM）是昆虫抵抗外源病源微生物入侵的第一道防线,围食膜因子与外源病原微生物入侵昆虫中肠细胞存在密切关系。研究家蚕围食膜因子在幼虫感染BmNPV过程中的功能,可为抗性育种和害虫防治提供新的基因资源和理论依据。本文以家蚕围食膜因子基因Bm011851为研究对象,克隆并分析了家蚕围食膜因子基因Bm011851,获得并检测了过表达Bm011851转基因家蚕幼虫的生长发育、经济性状及其对PM表面结构的影响,研究了Bm011851在BmNPV感染家蚕幼虫过程中的功能,以解析Bm011851参与抵抗病毒入侵的机制。主要研究结果如下:1.家蚕围食膜因子基因Bm011851的克隆及表达分析基因表达分析显示Bm011851在家蚕幼虫期表达,进食期表达量高于眠期,5龄时表达量达到最高水平,5龄6天后表达量开始下降;Bm011851在中肠中高量表达,且中部... 

【文章来源】：西南大学重庆市211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 昆虫杆状病毒概述
        1.1.1 杆状病毒的类型
        1.1.2 杆状病毒的生活史
        1.1.3 杆状病毒感染昆虫宿主的途径
    1.2 昆虫围食膜概述
        1.2.1 昆虫围食膜的类型
        1.2.2 昆虫围食膜的组成和结构
        1.2.3 昆虫围食膜的功能
    1.3 外源病原体入侵对昆虫围食膜的影响
        1.3.1 降解围食膜几丁质
        1.3.2 改变围食膜蛋白组分
        1.3.3 破坏围食膜中蛋白质与几丁质的结合
        1.3.4 影响围食膜的其他方式
    1.4 昆虫围食膜因子概述
        1.4.1 围食膜因子的特点
        1.4.2 围食膜因子的分类
        1.4.3 围食膜因子的功能
        1.4.4 围食膜因子基因的研究进展
第2章 引言
    2.1 研究背景
    2.2 目的及意义
    2.3 研究主要内容
    2.4 技术路线
第3章 家蚕围食膜因子基因Bm011851的克隆及表达分析
    3.1 实验材料及试剂
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 实验主要试剂配方
        3.1.5 分析工具
    3.2 实验方法
        3.2.1 家蚕幼虫不同时期中肠及不同组织cDNA材料制备
        3.2.2 家蚕围食膜因子基因Bm011851的克隆与表达
        3.2.3 家蚕Bm011851基因的生物信息学分析
        3.2.4 家蚕幼虫食下感染BmNPV后 Bm011851 基因表达
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 家蚕围食膜因子Bm011851的序列特征
        3.3.2 家蚕围食膜因子Bm011851的时空表达
        3.3.3 家蚕幼虫食下感染BmNPV后 Bm011851 基因表达
    3.4 讨论
第4章 过表达Bm011851转基因家蚕的获得
    4.1 实验材料及试剂
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 主要仪器
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 实验主要试剂配方
    4.2 实验方法
        4.2.1 家蚕围食膜因子Bm011851过表达转基因载体构建
        4.2.2 重组载体显微注射家蚕胚胎
        4.2.3 转基因家蚕阳性个体的筛选
        4.2.4 转基因家蚕阳性个体基因组的提取
        4.2.5 转基因家蚕阳性个体cDNA的获得
        4.2.6 转基因家蚕阳性个体的围食膜因子基因表达
        4.2.7 转基因家蚕阳性个体的经济性状调查
        4.2.8 扫描电镜观察转基因家蚕阳性个体的围食膜表面结构
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 过表达Bm011851转基因家蚕的获得及鉴定
        4.3.2 过表达Bm011851转基因家蚕的主要经济性状
        4.3.3 过表达Bm011851基因对家蚕围食膜表面结构的影响
        4.3.4 过表达Bm011851转基因家蚕中其他围食膜因子基因的表达
    4.4 讨论
第5章 Bm011851 基因在抵抗BmNPV入侵过程的功能研究
    5.1 实验材料及试剂
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 主要仪器
        5.1.3 主要试剂
        5.1.4 实验主要试剂配方
    5.2 实验方法
        5.2.1 BmNPV的收集及纯化
        5.2.2 转基因家蚕感染BmNPV半致死剂量调查
        5.2.3 转基因家蚕经口感染BmNPV后基因转录分析
        5.2.4 转基因家蚕感染BmNPV后围食膜表面结构观察
        5.2.5 转基因家蚕感染BmNPV后幼虫中肠材料的制备
        5.2.6 家蚕感染BmNPV后中肠组织石蜡切片的材料处理
        5.2.7 中肠组织石蜡切片的制备及染色
    5.3 实验结果与分析
        5.3.1 转基因家蚕经口感染BmNPV后的存活率
        5.3.2 转基因家蚕经口感染BmNPV后半致死剂量
        5.3.3 转基因家蚕经口感染BmNPV后病毒的增值复制
        5.3.4 转基因家蚕经口感染BmNPV后围食膜表面结构变化
        5.3.5 转基因家蚕经口感染BmNPV后家蚕中肠组织细胞变化
    5.4 讨论
第6章 全文总结
参考文献
附录
在读期间发表的论文及参加的课题
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕金属羧肽酶基因家族的鉴定与表达分析[J]. 朱玉苹,韩民锦,查绪乐,陈瑜,沈以红.  蚕业科学. 2016(03)
[2]昆虫体内的天然屏障——围食膜[J]. 姜姗彤,毛浪勇,刘晓勇,姚勤,陈克平.  生物学杂志. 2012(04)
[3]标记回收法确认我国北方地区草地螟的迁飞[J]. 陈阳,姜玉英,刘家骧,吕英,孟正平,陈静,唐继洪.  昆虫学报. 2012(02)
[4]光增白剂M2R对草地螟中肠围食膜的影响及对Bt毒力的增效作用[J]. 尹姣,郭巍,李克斌,曹雅忠.  昆虫学报. 2009(07)
[5]家蚕病毒病及防控对策[J]. 杨先宏,杨荣贵.  云南农业科技. 2009(S1)
[6]鞘翅目害虫-华北大黑鳃金龟围食膜结构的初步研究[J]. 李帅,李淑文,李长友,周洪旭,李国勋.  华北农学报. 2008(04)
[7]昆虫围食膜的研究概况[J]. 谢玉英,李绪友.  湖北生态工程职业技术学院学报. 2007(02)
[8]昆虫围食膜的研究进展[J]. 相静波,刘惠霞,吴文君.  昆虫知识. 2004(02)
[9]光增白剂对甜菜夜蛾围食膜结构的作用与影响[J]. 朱蓉,彭建新,洪华珠.  昆虫学报. 2003(04)
[10]昆虫杆状病毒表达系统研究进展及其应用展望[J]. 朱江,吴祥甫.  蚕业科学. 2003(02)

博士论文
[1]病原微生物黑胸败血芽孢杆菌（Bacillus bombyseptieus）等诱导家蚕（Bombyx mori）全基因组寄主应答研究[D]. 黄璐琳.西南大学 2010

硕士论文
[1]家蚕围食膜因子鉴定及其在BmNPV入侵中的功能研究[D]. 查绪乐.西南大学 2017
[2]家蚕肠粘蛋白基因的鉴定及功能分析[D]. 夏丹丹.西南大学 2015
[3]BmNPV病毒感染后家蚕中肠围食膜蛋白质的变化[D]. 陈艳萍.西南大学 2014
[4]BmNPV感染对家蚕幼虫中肠围食膜的影响[D]. 刘博.西南大学 2012



本文编号：3636583