桃褐腐病病原鉴定与多样性研究及其PG基因的克隆与表达

发布时间：2022-02-21 03:38

　　桃褐腐病（peach brown rot）是桃生产上最重要的病害之一,能够造成严重的产量损失。为明确我国不同桃产区褐腐病菌的种类及多样性和主要致病因素,本研究对我国不同桃产区褐腐病菌进行了鉴定和遗传多样性分析,并测定了不同产区来源分离株的致病性和胞壁降解酶活性,同时对主要致病因子多聚半乳糖醛酸酶基因PG1进行了克隆和表达分析,以探明不同产区桃褐腐病菌致病机制和差异,为不同产区桃褐腐病的防控提供理论基础。从我国12个省（市、自治区）共14个不同产区的桃褐腐病病果上分离获得23株桃褐腐病菌分离株。各分离株的PDA平板菌落形态略有差异,但来自云南的分离株hfyn与其他分离株明显不同。根据rDNA-ITS序列将云南分离株hfyn鉴定为云南丛梗孢（Monilia yunnanensis）,而其余22株分离株均鉴定为果生从梗孢（M fucticola）。多对特异性引物PCR以及多重PCR扩增分析也确证了上述鉴定结果。SNP单核苷酸多态性、RAPD和ISSR分子标记的遗传多样性分析表明,除鉴定为云南丛梗孢（M yunnanensis）的分离株hfyn与其他分离株亲缘关系最远以外,浙江丽水分离株hfz... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
    1 桃褐腐病概述
        1.1 发生与危害
        1.2 病菌及分布
        1.3 发生规律
        1.4 致病因子
        1.5 防治方法
    2 真菌的鉴定方法
        2.1 形态学鉴定
        2.2 分子鉴定
    3 真菌遗传多样性分析方法
        3.1 RAPD
        3.2 SSR
        3.3 ISSR
        3.4 SNP
        3.5 其他分子技术
    4 真菌致病因子研究进展
        4.1 酶
        4.2 毒素
        4.3 植物激素
        4.4 效应蛋白
    5 本研究的目的与意义
材料与方法
    1 材料
        1.1 植物材料
        1.2 菌株和质粒
        1.3 主要试剂与仪器
        1.4 主要培养基
        1.5 常用溶液和缓冲液
    2 病菌分离与纯化
        2.1 菌株分离、纯化
        2.2 菌株的保存
    3 病菌的鉴定
        3.1 生物学形态鉴定
        3.2 分子鉴定
    4 多样性分析
        4.1 SNP分析
        4.2 RAPD分析
        4.3 ISSR分析
    5 致病性测定
        5.1 病菌的致病性
        5.2 酶活性测定
    6 PG基因克隆与分析
        6.1 gDNA的提取
        6.2 目的片段的扩增与回收
        6.3 生物信息学分析
    7 PG基因的原核表达
        7.1 表达载体的构建
        7.2 融合蛋白的表达
        7.3 原核表达蛋白产物活性测定
结果与分析
    1 菌株的收集
        1.1 病菌的分离与纯化
    2 病菌的鉴定
        2.1 形态学特征
        2.2 分子鉴定
    3 菌株遗传多样性分析
        3.1 SNP分析
        3.2 RAPD分析
        3.3 ISSR引物分析
    4 致病性测定
        4.1 病菌在桃果实上的致病性比较
        4.2 病菌在寄主与非寄主果实上的致病性
    5 胞壁降解酶的活性分析
        5.1 酶活性的测定
        5.2 粗酶液的表型
    6 PG基因克隆和生物信息学分析
        6.1 PG基因的克隆
        6.2 PG基因的生物信息学
    7 PG基因原核表达
        7.1 载体构建
        7.2 PG基因的表达
        7.3 重组菌表达产物活性分析
讨论
    1 桃褐腐病菌种类和分布
    2 褐腐病菌的遗传多样性
    3 PG多样性及在致病中的作用
全文小结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]东北地区茄子黄萎病菌致病力分化与ISSR遗传变异分析[J]. 贲海燕,曲红云,高苇,张军民,张雪岩,李宝聚,柴阿丽.  园艺学报. 2019(07)
[2]25个无花果品系间种质资源的RAPD分析[J]. 陈桂平,鲁雪林.  中药材. 2019(02)
[3]四种药剂对桃褐腐病的防治效果试验报告[J]. 李正.  上海农业科技. 2019(01)
[4]单核苷酸多态性（SNP）分子标记在小麦遗传育种中的研究进展[J]. 吴澎,刘娟,田纪春.  农学学报. 2019(01)
[5]一株新型稻瘟霉素链霉菌JZB130180的鉴定及其对桃褐腐病的生防效果评价（英文）[J]. Mi NI,Qiong WU,Hong-li WANG,Wei-cheng LIU,Bin HU,Dian-peng ZHANG,Juan ZHAO,De-wen LIU,Cai-ge LU.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2019(01)
[6]肟菌·戊唑醇等杀菌剂对桃褐腐病的防治效果[J]. 周华光,许燎原,梁文勇,杨芳立,汪春涛.  浙江农业科学. 2018(12)
[7]新疆棉花黄萎病的发生现状及其病原菌的分子鉴定与ISSR分析[J]. 刘海洋,王琦,王伟,张仁福,姚举.  植物保护学报. 2018(06)
[8]香蕉枯萎病菌致病力分化与ISSR遗传多样性分析[J]. 黄穗萍,郭堂勋,李其利,唐利华,莫贱友,李焜华,孙宪昀.  植物保护. 2018(06)
[9]青花菜乙烯反应传感蛋白基因BoERS的克隆与表达分析[J]. 蒋明,张志仙,张慧娟,管铭,陈孝赏,尹龙飞,刘洁.  核农学报. 2019(01)
[10]基于SSR标记的桃种质资源遗传多样性研究[J]. 凌士鹏,孙萍,林贤锐,沈建生.  江西农业学报. 2018(11)

博士论文
[1]中国核果/仁果类果树褐腐病菌种群结构及Cyt b基因的遗传进化研究[D]. 尹良芬.华中农业大学 2015
[2]中国桃褐腐病菌及其抗药性相关研究[D]. 胡勐郡.华中农业大学 2013

硕士论文
[1]玉米弯孢叶斑病菌PG基因家族鉴定及Clpg1在致病性中的作用[D]. 赵丰舟.黑龙江八一农垦大学 2016
[2]果树褐腐病菌Monilia yunnanensis遗传多样性的RAPD分析[D]. 闫大琦.华中农业大学 2016
[3]桃褐腐病菌Monilia mumecola对四种杀菌剂的敏感性测定及遗传多样性分析[D]. 都胜芳.华中农业大学 2016
[4]桃褐腐病菌Monilinia fructicola中Mona元件的功能研究[D]. 袁楠楠.华中农业大学 2015
[5]小麦条锈病新抗源L693抗性基因的EST分子标记作图与共线性片段分析[D]. 王苓.四川农业大学 2015
[6]水稻纹枯病菌PG基因的克隆、表达及致病性分析[D]. 张家豪.扬州大学 2015
[7]RGA、HCBT类抗病相关基因在小麦抗叶锈近等基因系中的检测分析[D]. 郭楠.河北农业大学 2013
[8]葡萄水杨酸和茉莉酸信号转导途径中4个重要基因的克隆及表达分析[D]. 王文艳.南京农业大学 2011
[9]金银花内生真菌的分离鉴定和分子系统学研究[D]. 殷法杰.山东中医药大学 2011
[10]龙眼拟茎点霉细胞壁降解酶及其致病机理的研究[D]. 张洪祥.福建农林大学 2010



本文编号：3636423