RNA干扰hTERT基因对人恶性黑素瘤A375细胞迁移和侵袭的影响

发布时间：2022-02-21 21:37

　　目的:使用特异性siRNA靶向干扰黑素瘤A375细胞中hTERT基因的表达后,观察对黑素瘤细胞迁移和侵袭能力的影响,从而探索hTERT基因在黑素瘤发病过程中的作用。方法:培养黑素瘤A375细胞,分别设置空白对照组、阴性对照组和干扰组。干扰组的黑素瘤A375细胞转染课题组前期筛选出的特异性hTERT siRNA,阴性对照组则使用阴性对照siRNA对细胞进行转染,空白对照组细胞不做处理。Real-Time PCR和Western-blot实验分别检测各组细胞中hTERT m RNA和蛋白的表达水平,之后使用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力。结果:干扰组中使用特异性hTERT siRNA靶向干扰hTERT基因可明显下调hTERT基因m RNA和蛋白的表达,与阴性对照组和空白对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,当黑素瘤A375细胞中hTERT基因表达沉默后,细胞的迁移和侵袭能力也出现明显下降（P<0.05）。结论:特异性hTERT siRNA可以有效沉默黑素瘤A375细胞中hTERT基因... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区211工程院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
前言
实验内容与方法
    1 材料和试剂
        1.1 实验细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 实验常用试剂及其配置
        1.5 引物合成
        1.6 siRNA的选择及合成
    2.实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 细胞转染
        2.3 提取细胞总RNA
        2.4 琼脂糖凝胶电泳测定
        2.5 反转录合成c DNA
        2.6 Real-time PCR
        2.7 细胞总蛋白提取
        2.8 细胞蛋白浓度测定
        2.9 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
        2.10 转膜
        2.11 封闭与抗体孵育
        2.12 化学发光、显影与定影
        2.13 凝胶图像分析
        2.14 细胞划痕实验
        2.15 Transwell侵袭实验
    3 统计方法
结果
    1 各组细胞中h TERT基因的表达情况
        1.1 RNA样本质检结果
        1.2 PCR扩增曲线及溶解曲线
        1.3 Real-Time PCR检测h TERTmRNA的表达水平
        1.4 Western-blot检测h TERT蛋白的表达水平
    2 靶向干扰hTERT基因对黑素瘤A375 细胞迁移能力的影响
    3 靶向干扰hTERT基因对黑素瘤A375 细胞侵袭能力的影响
讨论
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
作者简介
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]人端粒酶反转录酶mRNA在不同类型黑素瘤中的表达及其意义[J]. 曾明凤,康晓静,曾颖,柴莉,吴秀娟,赵娟,孙振柱,王莹,王唯嘉.  肿瘤研究与临床. 2016 (07)



本文编号：3638083