小麦ZCCT2基因表达载体构建与农杆菌转化

发布时间：2022-05-06 20:42

　　小麦（Triticum aestivum L.）是世界上种植最广泛的粮食作物,大约有40%的人口以小麦作为主食。小麦为世界人口提供20%的能量和25%左右的蛋白质。春化基因（VRN）和光周期基因（PPD）对小麦的生殖生长起重要调控作用,这两个基因的等位多样性决定了小麦对环境的广适性。小麦VRN2基因被认为是主要的开花抑制因子,在冬季低温环境中防止冬小麦开花,但低温（春化）可以降低该基因的表达,消除该基因对开花的抑制作用,使冬小麦品种能够在次年春季开花。小麦VRN2基因座位包括ZCCT1和ZCCT2两个串联的基因。虽然研究认为小麦ZCCT1基因是小麦春化的相关基因,ZCCT2基因与开花有关,但目前没有证据证明ZCCT2是小麦春化相关基因,其功能尚不明确。本研究分别构建了ZCCT1和ZCCT2两个基因在小麦A、B、D三个染色体组上的单靶点敲除载体、多靶点敲除载体、过表达载体以及沉默载体,利用农杆菌介导转基因技术,以期初步分析ZCCT2基因在小麦中的功能,明确ZCCT2与小麦冬性强弱的关系,将有助于评价品种适应性以及分子标记辅助育种。主要结果如下:1.单靶点敲除载体构建:利用在线靶点设计网站... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 春化作用
        1.1.1 春化作用研究历程
        1.1.2 春化作用中的物质变化
    1.2 小麦冬春性的鉴定方法
    1.3 抗寒性与小麦冬春特性的关系
    1.4 春化相关基因
        1.4.1 VRN1
        1.4.2 VRN2
        1.4.3 VRN3
        1.4.4 VRN4
    1.5 基因编辑技术研究进展
        1.5.1 CRISPR/Cas系统
        1.5.2 CRISPR/Cas系统的作用机制及分类
        1.5.3 CRISPR/Cas系统的发展经过
        1.5.4 基因编辑在小麦中的应用
    1.6 本研究的意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
    2.2 试验方法
        2.2.1 靶点设计
        2.2.2 构建转基因植物表达载体
        2.2.3 小麦原生质体的分离及转化
        2.2.4 EHA105 农杆菌感受态细胞的转化
        2.2.5 转基因苗鉴定
3 结果与分析
    3.1 ZCCT1、ZCCT2 基因表达载体构建
        3.1.1 单靶点敲除载体构建
        3.1.2 多靶点敲除载体构建
        3.1.3 过表达载体与沉默载体构建
    3.2 原生质体验证
    3.3 转基因植株鉴定及表型分析
4 讨论
    4.1 表达载体的构建
    4.2 ZCCT2 基因与小麦冬春性的关系
5 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]小麦春化相关基因TaVRN2和NF-Y家族基因TaNF-YB3的分离与功能分析[D]. 董秀春.山东农业大学 2011

硕士论文
[1]不同小麦品种春化、光周期基因分子标记检测和抗冻性机制的分析[D]. 张文超.河南大学 2013
[2]普通小麦春化基因VRN2的克隆及表达特性分析[D]. 马丽娟.河南农业大学 2012
[3]低温下冬小麦糖积累及代谢关键酶表达的研究[D]. 曾俨.东北农业大学 2011
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本文编号：3651181