Wnt/β-catenin信号通路在大气PM 2.5 引起p16基因甲基化及细胞生物行为学改变中作用的研究
发布时间：2022-07-08 11:55
目的大气PM2.5作为空气污染物之一,与肺癌的发生发展有着明显的关联,本研究探讨Wnt/β-catenin信号通路在大气PM2.5引起人支气管上皮细胞（Beas-2B）、非小细胞肺癌细胞（A549）p16抑癌基因启动子甲基化改变中的关键作用;探讨Wnt/β-catenin信号通路在大气PM2.5引起上述两种细胞生物行为改变中的作用。分别用正常支气管上皮细胞、肺癌细胞建模进行体外实验,从致癌、促癌两个角度研究大气PM2.5对肺癌的相关分子机制。方法根据课题组前期大气PM2.5采集方法,采集大气PM2.5,干燥、称重后溶解于DMSO,将其浓度定为100 mg/mL备用。不同浓度大气PM2.5染毒Beas-2B、A549细胞24小时后,MTT、细胞划痕及Transwell实验确定细胞染毒浓度;同样以MTT实验确定DKK-1抑制剂最佳浓度;Western blot法检测经不同浓度PM2.5处理及加入抑制剂DKK-1与PM...
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料与方法
2.1 细颗粒物采样器材和材料
2.2 实验仪器及设备
2.3 细胞相关材料与试剂
2.4 主要试剂配制方法
2.5 大气PM_(2.5) 颗粒物的采集方法
2.6 细胞培养
2.7 细胞染毒及TGF-β1 孵育
2.8 细胞毒性试验（MTT法）
2.9 Transwell小室侵袭实验检测A549细胞体外侵袭力
2.10 甲基化特异性PCR
2.11 细胞蛋白提取定量及Western blot
2.12 RT-q PCR实验
2.13 统计分析
3 结果
3.1 大气PM_(2.5) 及DKK-1 对A549细胞存活率的影响
3.2 大气PM_(2.5)对A549细胞DNMT1蛋白表达及p16甲基化状态的影响
3.3 大气PM_(2.5) 对A549细胞迁移力的影响
3.4 大气PM_(2.5) 对A549细胞侵袭力的影响
3.5 倒置显微镜下观察不同浓度PM_(2.5) 染毒后细胞形态
3.6 PM_(2.5) 促进A549细胞上皮间充质转化
3.7 PM_(2.5) 对A549细胞Wnt/β-catenin通路的影响
3.8 DKK-1 抑制A549细胞中Wnt/β-catenin信号通路
3.9 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后A549细胞DNMT1蛋白表达水平
3.10 DKK-1 抑制Wnt/β-catenin经典信号通路后A549细胞中p16甲基化改变
3.11 DKK-1 与PM_(2.5)共孵育后对A549细胞迁移力的改变
3.12 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后对A549细胞侵袭力的改变
3.13 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后A549细胞EMT蛋白表达水平
3.14 大气PM_(2.5) 及DKK-1 对Beas-2B细胞存活率的影响
3.15 大气PM_(2.5) 影响Beas-2B细胞DNMTs蛋白及m RNA的表达
3.16 大气PM_(2.5) 对Beas-2B细胞p16甲基化的影响
3.17 PM_(2.5) 促进TGF-β1 介导的Beas-2B细胞上皮间充质转化
3.18 大气PM_(2.5) 对Beas-2B细胞Wnt/β-catenin通路的影响
3.19 DKK-1 抑制Beas-2B细胞Wnt/β-catenin经典信号通路
3.20 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B细胞DNMTs蛋白及m RNA的表达
3.21 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B细胞p16甲基化改变
3.22 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B细胞上皮间充质转化水平改变
4 讨论
结论
参考文献
附录
致谢
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]p16与非小细胞肺癌临床病理的关系及5-Aza-CdR对肺癌A549细胞中p16表达的影响[J]. 华丛书,马冬春,陈海,张朝东,王文生,丁翔,赵健,吴峰. 四川大学学报(医学版). 2018(03)
[2]基于3种基因启动子甲基化联合端粒长度构建肺癌筛查神经网络模型[J]. 王威,段晓冉,谭善娟,姚永成,吴逸明,吴拥军. 郑州大学学报(医学版). 2014(02)
[3]DNA甲基化转移酶及DNA甲基化转移酶抑制剂在肿瘤研究中的新视角[J]. 李明,宋永胜,吴斌,卜仁戈. 癌症进展. 2012(06)
[4]miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用[J]. 梁永俊,周佽想,宇小婷,赵倩. 上海交通大学学报(医学版). 2012(06)
本文编号：3656981
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料与方法
2.1 细颗粒物采样器材和材料
2.2 实验仪器及设备
2.3 细胞相关材料与试剂
2.4 主要试剂配制方法
2.5 大气PM_(2.5) 颗粒物的采集方法
2.6 细胞培养
2.7 细胞染毒及TGF-β1 孵育
2.8 细胞毒性试验（MTT法）
2.9 Transwell小室侵袭实验检测A549细胞体外侵袭力
2.10 甲基化特异性PCR
2.11 细胞蛋白提取定量及Western blot
2.12 RT-q PCR实验
2.13 统计分析
3 结果
3.1 大气PM_(2.5) 及DKK-1 对A549细胞存活率的影响
3.2 大气PM_(2.5)对A549细胞DNMT1蛋白表达及p16甲基化状态的影响
3.3 大气PM_(2.5) 对A549细胞迁移力的影响
3.4 大气PM_(2.5) 对A549细胞侵袭力的影响
3.5 倒置显微镜下观察不同浓度PM_(2.5) 染毒后细胞形态
3.6 PM_(2.5) 促进A549细胞上皮间充质转化
3.7 PM_(2.5) 对A549细胞Wnt/β-catenin通路的影响
3.8 DKK-1 抑制A549细胞中Wnt/β-catenin信号通路
3.9 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后A549细胞DNMT1蛋白表达水平
3.10 DKK-1 抑制Wnt/β-catenin经典信号通路后A549细胞中p16甲基化改变
3.11 DKK-1 与PM_(2.5)共孵育后对A549细胞迁移力的改变
3.12 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后对A549细胞侵袭力的改变
3.13 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后A549细胞EMT蛋白表达水平
3.14 大气PM_(2.5) 及DKK-1 对Beas-2B细胞存活率的影响
3.15 大气PM_(2.5) 影响Beas-2B细胞DNMTs蛋白及m RNA的表达
3.16 大气PM_(2.5) 对Beas-2B细胞p16甲基化的影响
3.17 PM_(2.5) 促进TGF-β1 介导的Beas-2B细胞上皮间充质转化
3.18 大气PM_(2.5) 对Beas-2B细胞Wnt/β-catenin通路的影响
3.19 DKK-1 抑制Beas-2B细胞Wnt/β-catenin经典信号通路
3.20 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B细胞DNMTs蛋白及m RNA的表达
3.21 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B细胞p16甲基化改变
3.22 DKK-1 与PM_(2.5) 共孵育后Beas-2B细胞上皮间充质转化水平改变
4 讨论
结论
参考文献
附录
致谢
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]p16与非小细胞肺癌临床病理的关系及5-Aza-CdR对肺癌A549细胞中p16表达的影响[J]. 华丛书,马冬春,陈海,张朝东,王文生,丁翔,赵健,吴峰. 四川大学学报(医学版). 2018(03)
[2]基于3种基因启动子甲基化联合端粒长度构建肺癌筛查神经网络模型[J]. 王威,段晓冉,谭善娟,姚永成,吴逸明,吴拥军. 郑州大学学报(医学版). 2014(02)
[3]DNA甲基化转移酶及DNA甲基化转移酶抑制剂在肿瘤研究中的新视角[J]. 李明,宋永胜,吴斌,卜仁戈. 癌症进展. 2012(06)
[4]miR-506通过靶向Slug调节上皮间充质转化对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制作用[J]. 梁永俊,周佽想,宇小婷,赵倩. 上海交通大学学报(医学版). 2012(06)
本文编号：3656981
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3656981.html
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