长爪沙鼠CRISPR/Cas9基因敲除方法的初步建立

发布时间：2022-07-08 11:46

　　长爪沙鼠作为一种待开发的―多功能‖实验动物,具有广泛应用前景。国内外学者利用长爪沙鼠特殊的生物特性建立了多种人类疾病动物模型。为了研究诸多疾病的发生、发展、治疗和转归机制需要各种实验动物模型,但目前长爪沙鼠尚未建立转基因及基因敲除/敲减等动物模型。本实验利用一种新型的应用广泛的方便快捷的方法—CRISPR/Cas9技术在长爪沙鼠上进行转基因方法探索,为长爪沙鼠动物模型研究和相关基因功能奠定技术基础。原核生物中CRISPR-Cas编码的是一种适应性免疫系统用来抵御感染的病毒和质粒。免疫是由Cas核酸,通过小型RNA介导（crRNAs）其酶切入侵的核酸的基因组内特定酶切解位点。在II型CRISPR-Cas系统中,DNA切割活性通过由RNA引导单一酶Cas9进行。使用合成单个引导RNA（gRNA）,Cas9可以重新编程中的各种生物的基因组以创建特定双链DNA断裂,几乎在所以实验动物中,都可以构成用于遗传工程的有力工具。动物克隆和转基因等胚胎生物技术需要超数排卵提供足够数量的卵与胚胎,因此超数排卵对动物胚胎生物技术研究具有重要意义。为了得到长爪沙鼠最佳的超数排卵方案,我们通过对长爪沙鼠使用时周... 

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英文缩略表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 PMSG和hCG诱导的长爪沙鼠超数排卵方案的优化
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    讨论
    结论
第二部分 gRNA的设计及筛选
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    讨论
    结论
第三部分 长爪沙鼠CRISPR/Cas9基因敲除方法的初步建立
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    讨论
    结论
文献综述
参考文献
攻读学位期间文章发表情况
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]A double-edged sword: CRISPR-Cas9 is emerging as a revolutionary technique for genome editing[J]. Chun-Xiao Li,Hai-Li Qian.  Military Medical Research. 2015(03)
[2]A detailed procedure for CRISPR/Cas9-mediated gene editing in Arabidopsis thaliana[J]. Wenshan Liu,Xiaohong Zhu,Mingguang Lei,Qingyou Xia,Jose Ramon Botella,Jian-Kang Zhu,Yanfei Mao.  Science Bulletin. 2015(15)
[3]基因组编辑技术的研究进展[J]. 李东,左其生,张亚妮,李碧春.  畜牧与兽医. 2015(07)
[4]CRISPR/Cas9系统——靶向基因组编辑的新策略[J]. 赵海卫,吕欣,尹文.  中国病原生物学杂志. 2015(03)
[5]CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展[J]. 李聪,曹文广.  生物工程学报. 2015(11)
[6]Applications of CRISPR-Cas9 mediated genome engineering[J]. Xiao Yang.  Military Medical Research. 2015(01)
[7]CRISPR/Cas9系统:构建非人灵长类动物疾病模型的新技术[J]. 杨伟莉,涂著池,李晓江.  中国比较医学杂志. 2014(08)
[8]乙二醇玻璃化冷冻液二步法对长爪沙鼠2-细胞胚胎的冷冻保存[J]. 郭红刚,卢领群,周生来,戴方伟,李巍,李长龙,陈振文,萨晓婴.  实验动物科学. 2014(04)
[9]CRISPR/Cas基因组靶向编辑技术综述[J]. 贾良杰.  中国医药导报. 2014(22)
[10]长爪沙鼠的生物净化技术[J]. 卢领群,宋晓明,戴方伟,周莎桑,李长龙,马伟锋,柯贤福,楼琦,吕宇,萨晓婴.  中国比较医学杂志. 2014(04)

博士论文
[1]EGFR基因缺失突变检测新技术及其应用于游离DNA检测的可行性[D]. 肖莉.苏州大学 2014
[2]应用类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）定点修饰猪基因组[D]. 杨翌.吉林大学 2014



本文编号：3656969