CRISPR/Cas9系统介导的斑马鱼park2基因的定点敲除

发布时间：2022-07-15 14:01

　　作为目前最新、最先进的基因编辑技术,CRISPR/Cas9系统为分子细胞生物学带来革命性发展,以它的简单高效、灵活性以及可实现DNA序列的定向突变而被广泛使用.斑马鱼的park2基因位于第13号染色体上,编码的Parkin蛋白是一个E3泛素连接酶.该基因在斑马鱼中的功能还不清楚.利用CRISPR/Cas9系统,首次在斑马鱼胚胎中实现了park2基因的大片段删除.由于斑马鱼在发育和疾病研究中有很大优势,实现park2基因敲除将有助于将来进一步研究该基因的功能. 

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 斑马鱼品系及饲养
    1.2 斑马鱼胚胎基因组DNA提取与PCR扩增
    1.3 Cas9 mRNA和sgRNA的体外合成与纯化
    1.4 斑马鱼胚胎显微注射
        1.4.1 配鱼及受精卵的收集:
        1.4.2 断针与定量:
        1.4.3 显微注射:
2 结果与分析
    2.1 突变park2基因的实验设计
    2.2 Cas9靶点的选择与优化
    2.3 大片段删除效率检测及测序结果分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Efficient Gene Targeting in Zebrafish Mediated by a Zebrafish-Codon-Optimized Cas9 and Evaluation of Off-Targeting Effect[J]. Da Liu,Zhanxiang Wang,An Xiao,Yutian Zhang,Wenyuan Li,Yao Zu,Shaohua Yao,Shuo Lin,Bo Zhang.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(01)



本文编号：3662184