CGMMV外壳蛋白和复制相关蛋白基因突变体致病性分析
发布时间：2022-07-22 18:56
黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）是葫芦科作物上的重要病毒之一,给葫芦科作物的生产造成了严重的威胁。近十年来,CGMMV在世界范围内的蔓延范围仍在不断扩大。本文以CGMMV不同突变体为研究对象,对其突变体致病性进行分析,发现决定致病性的关键位点,进一步了解该病毒致病的分子机理。病毒外壳蛋白不仅是病毒正常组装所必须的,还参与了病毒的长距离运输过程。通过农杆菌浸润接种的方法,对CGMMV CP丙氨酸扫描文库各个突变体在本生烟和西瓜上的致病性进行了初步筛选,并通过DAS-ELISA和一步RT-PCR对病毒进行检测。在接种本生烟后,所有的134个突变体中,有23个丙氨酸突变体在接种本生烟后症状发生改变,且突变前大部分为非极性氨基酸。还有49个突变体在接种后未显症,且病毒检测为阴性。另外,症状改变的突变体在CP蛋白亚基上的定位有一定可循规律,23个突变位点全部定位于四个α螺旋内侧的中空结构区域内,且在三级结构上位于病毒外壳蛋白亚基外表面区域。黄瓜绿斑驳花叶病毒的病毒起始装配位点是位于病毒基因组RNA上,当外壳蛋白聚合体与病毒基因...
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒概况
1.1.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒的起源
1.1.2 生物学特性
1.1.3 分子生物学特性
1.2 病毒检测方法
1.2.1 生物学鉴定
1.2.2 血清学检测
1.2.3 电镜观察
1.2.4 分子生物学检测
1.3 植物病毒侵染性克隆技术
1.4 CGMMV突变体致病性研究的分子生物学基础
1.5 CGMMV弱毒株研究进展
1.6 本研究的目的与意义
第二章 CP突变体致病性分析
2.1 材料与试剂
2.1.1 菌株与植物材料
2.1.2 试验中所用酶与其它试剂
2.1.3 仪器与设备
2.1.4 溶液的配置方法
2.2 实验方法
2.2.1 突变体的构建
2.2.2 接种和样品的采集
2.2.3 突变体侵染性的检测
2.3 结果与分析
2.3.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒CP突变体库在本生烟上的症状分析
2.3.2 突变体侵染性检测及其在CP外壳蛋白上的分布情况
2.3.3 黄瓜绿斑驳花叶病毒突变体在本生烟和西瓜上致病性比较
2.3.4 病毒起始装配位点突变体补偿性症状的发生
2.3.5 CP蛋白第96位氨基酸能够影响病毒致病性
2.3.6 E96K相关突变体病毒RNA积累量与致病性关系分析
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 复制相关蛋白突变体致病性分析
3.1 材料和试剂
3.2 实验方法
3.2.1 突变位点的选择
3.2.2 突变体的构建
3.2.3 侵染性检测
3.3 结果与分析
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 全文结论
4.1 主要结论
4.2 创新点
4.3 下一步工作展望
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄瓜绿斑驳花叶病毒核酸试纸条检测技术的建立[J]. 霍亚云,张永江,李为民,朱罗罗,胡林,尤其敏. 北方园艺. 2017(10)
[2]黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展[J]. 刘华威,罗来鑫,朱春雨,梁超琼,刘鹏飞,李健强. 植物保护. 2016(06)
[3]黄瓜绿斑驳花叶病毒磁免疫层析试纸条的研制[J]. 魏梅生,李桂芬,马洁,朱水芳,王军平,文朝慧. 植物保护. 2014(03)
[4]西瓜感染黄瓜绿斑驳花叶病毒后糖的变化与倒瓤关系的研究[J]. 李立梅,吴元华,赵秀香,王文航,王林,蔡明. 植物病理学报. 2011(03)
[5]葫芦种子传黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测[J]. 秦碧霞,蔡健和,陆秀红,林林,廖富荣,刘志明. 植物保护. 2011(03)
[6]黄瓜绿斑驳花叶病毒西瓜、甜瓜种子的带毒率和传毒率[J]. 吴会杰,秦碧霞,陈红运,彭斌,蔡建和,古勤生. 中国农业科学. 2011(07)
[7]黄瓜绿斑驳花叶病毒对西瓜产量、品质及种子带毒的影响[J]. 李立梅,吴元华,赵秀香,王文航,王林,蔡明. 植物保护. 2010(06)
[8]黄瓜绿斑驳花叶病毒检测技术的研究进展[J]. 罗梅,王琳,宾淑英,林进添. 华中农业大学学报. 2010(03)
[9]黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的研制[J]. 李桂芬,曹振,马杰,李明福,陈笑瑜,丁建云,李娜. 植物保护. 2009(06)
[10]南瓜种子中黄瓜绿斑驳花叶病毒IC-RT-PCR检测方法的建立[J]. 黄静,廖富荣,林石明,陈青. 漳州职业技术学院学报. 2009(01)
硕士论文
[1]黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-LAMP检测和番茄斑萎病毒的胶体金免疫层析试纸条检测[D]. 李晋玉.南京农业大学 2014
本文编号：3665154
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒概况
1.1.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒的起源
1.1.2 生物学特性
1.1.3 分子生物学特性
1.2 病毒检测方法
1.2.1 生物学鉴定
1.2.2 血清学检测
1.2.3 电镜观察
1.2.4 分子生物学检测
1.3 植物病毒侵染性克隆技术
1.4 CGMMV突变体致病性研究的分子生物学基础
1.5 CGMMV弱毒株研究进展
1.6 本研究的目的与意义
第二章 CP突变体致病性分析
2.1 材料与试剂
2.1.1 菌株与植物材料
2.1.2 试验中所用酶与其它试剂
2.1.3 仪器与设备
2.1.4 溶液的配置方法
2.2 实验方法
2.2.1 突变体的构建
2.2.2 接种和样品的采集
2.2.3 突变体侵染性的检测
2.3 结果与分析
2.3.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒CP突变体库在本生烟上的症状分析
2.3.2 突变体侵染性检测及其在CP外壳蛋白上的分布情况
2.3.3 黄瓜绿斑驳花叶病毒突变体在本生烟和西瓜上致病性比较
2.3.4 病毒起始装配位点突变体补偿性症状的发生
2.3.5 CP蛋白第96位氨基酸能够影响病毒致病性
2.3.6 E96K相关突变体病毒RNA积累量与致病性关系分析
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 复制相关蛋白突变体致病性分析
3.1 材料和试剂
3.2 实验方法
3.2.1 突变位点的选择
3.2.2 突变体的构建
3.2.3 侵染性检测
3.3 结果与分析
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 全文结论
4.1 主要结论
4.2 创新点
4.3 下一步工作展望
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄瓜绿斑驳花叶病毒核酸试纸条检测技术的建立[J]. 霍亚云,张永江,李为民,朱罗罗,胡林,尤其敏. 北方园艺. 2017(10)
[2]黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展[J]. 刘华威,罗来鑫,朱春雨,梁超琼,刘鹏飞,李健强. 植物保护. 2016(06)
[3]黄瓜绿斑驳花叶病毒磁免疫层析试纸条的研制[J]. 魏梅生,李桂芬,马洁,朱水芳,王军平,文朝慧. 植物保护. 2014(03)
[4]西瓜感染黄瓜绿斑驳花叶病毒后糖的变化与倒瓤关系的研究[J]. 李立梅,吴元华,赵秀香,王文航,王林,蔡明. 植物病理学报. 2011(03)
[5]葫芦种子传黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测[J]. 秦碧霞,蔡健和,陆秀红,林林,廖富荣,刘志明. 植物保护. 2011(03)
[6]黄瓜绿斑驳花叶病毒西瓜、甜瓜种子的带毒率和传毒率[J]. 吴会杰,秦碧霞,陈红运,彭斌,蔡建和,古勤生. 中国农业科学. 2011(07)
[7]黄瓜绿斑驳花叶病毒对西瓜产量、品质及种子带毒的影响[J]. 李立梅,吴元华,赵秀香,王文航,王林,蔡明. 植物保护. 2010(06)
[8]黄瓜绿斑驳花叶病毒检测技术的研究进展[J]. 罗梅,王琳,宾淑英,林进添. 华中农业大学学报. 2010(03)
[9]黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的研制[J]. 李桂芬,曹振,马杰,李明福,陈笑瑜,丁建云,李娜. 植物保护. 2009(06)
[10]南瓜种子中黄瓜绿斑驳花叶病毒IC-RT-PCR检测方法的建立[J]. 黄静,廖富荣,林石明,陈青. 漳州职业技术学院学报. 2009(01)
硕士论文
[1]黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-LAMP检测和番茄斑萎病毒的胶体金免疫层析试纸条检测[D]. 李晋玉.南京农业大学 2014
本文编号：3665154
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3665154.html
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