古尔图病毒重组截短糖蛋白基因的表达及抗体的制备

发布时间：2022-08-10 13:38

　　目的 原核表达古尔图病毒（Guertu virus, GTV）糖蛋白截短片段（Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2）,分别纯化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重组蛋白并制备其多克隆抗体。方法 采用RT-PCR的方法分别扩增得到GTV DXM毒株截短糖蛋白Gn、Gn1、Gn2、Gn3、Gc1和Gc2基因片段,并将其构建到原核表达载体pET-32a（＋）中,继而转化到E.coli BL21（DE3）中进行诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白质大小。经镍柱亲和层析纯化Gn-His、Gc1-His和Gc2-His重组蛋白,用GTV阳性羊血清通过Western blot法检测重组蛋白的抗原性。用纯化的蛋白质分别免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA法检测血清效价。将构建的真核表达载体pcDNA3.1-Gn和pcDNA3.1-Gc1/Gc2转染至哺乳动物Vero细胞,并用间接免疫荧光法评估前述制备的兔多克隆抗体的结合活性。最后用Western blot法检测血清与重组蛋白的特异性反应能力。结果 双酶切鉴定和测序结果表明pET-32a-Gn、pET-32a-Gn1/Gn2/Gn3、p... 

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【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3673733