转TaTLP1基因小麦的获得及抗叶锈性分析

发布时间：2022-09-21 19:03

　　类甜蛋白（thaumatin-like protein, TLP）是一类具有抗真菌功能的病程相关蛋白（pathogenesisrelated proteins, PRPs）,在植物病理学研究中受到越来越广泛的关注。本研究将前期获得的小麦（Triticum aestivum） TaTLP1基因定向插入到玉米（Zea mays）泛素（ubiquitin, Ubi）启动子驱动的表达载体pLGY-02中,利用农杆菌（Agrobacterium）介导的遗传转化将pLGY-TaTLP1重组体转化至小麦感叶锈病农家品种’JW’中,侵染幼胚140个,获得31个再生株系,再生率为22.1%。对转TaTLP1基因小麦的T₁～T₄代植株进行PCR验证,初步筛选出了稳定遗传表达的转基因阳性植株;qRT-PCR分析明确了TaTLP1基因在转基因阳性小麦中超量表达;对连续4代小麦接种叶锈菌（Puccinia triticina）的抗性鉴定则表明,TaTLP1基因的过表达提高了转基因植株对小麦叶锈病的抗性;纯合后代生理生化含量的测定进一步证实了转TaTLP1基因小麦中的脯... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 主要试剂
    1.3 实验方法
        1.3.1 TaTLP1基因植物表达载体的构建
        1.3.2 农杆菌法转化小麦幼胚愈伤组织及植株再生
        1.3.3 转基因小麦阳性植株的鉴定
        1.3.4 转基因植株的叶锈病抗性鉴定
        1.3.5 RNA的提取和cDNA第1链合成
        1.3.6 转基因小麦TaTLP1的表达分析
        1.3.7 转基因小麦的生理指标测定
2 结果与分析
    2.1 转基因表达载体的构建及转基因植株的获得
    2.2 转TaTLP1基因后代植株的获得
    2.3 转基因小麦植株的PCR检测
    2.4 转基因小麦叶锈病抗性鉴定
    2.5 转基因小麦中TaTLP1的表达分析
    2.6 叶锈菌对小麦叶片中脯氨酸含量的影响
    2.7 转基因小麦中β-1,3-葡聚糖酶活性的分析
    2.8 叶锈菌胁迫下转基因小麦叶片H2O2含量的测定
    2.9 叶锈菌对小麦叶片过氧化物酶活性的影响
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]植物类甜蛋白基因家族研究进展[J]. 刘潮,韩利红,王海波,高永,唐利洲.  生物技术通报. 2018(03)
[2]DNS法测定带有保护剂的β-葡聚糖酶酶活研究[J]. 李皎,杨国武,汪大敏,毛勇,邓媛.  陕西农业科学. 2014(07)
[3]紫外分光光度技术测定植物细胞中H2O2的含量[J]. 夏金婵,苗雨晨,宋纯鹏,苗琛.  四川大学学报(自然科学版). 2005(06)

博士论文
[1]盐胁迫下陆地棉根蛋白差异表达分析及耐盐相关基因的功能鉴定[D]. 李武.河南大学 2016

硕士论文
[1]小麦与叶锈菌互作过程中H2O2的分布及其代谢相关酶基因的表达分析[D]. 王鑫.河北农业大学 2013



本文编号：3680492