5’非编码区内含子在约氏疟原虫基因表达调控中的作用和功能

发布时间：2022-10-15 13:12

　　疟疾（Malaria）是全球三大传染病之一,每年仍有40万以上的人口因疟疾死亡。疟疾的病原体疟原虫有十分复杂的生活史,在雌性按蚊（Anopheles）和脊椎动物之间交替发生有性生殖与无性生殖。在不同发育阶段中复杂的基因表达调控是疟原虫适应不同宿主环境的关键。疟原虫的基因表达调控受转录因子、启动子、增强子、非编码RNA和表观遗传学等因素调控。本课题组之前在约氏疟原虫（Plasmodium yoelii）的研究中发现300多个5’或3’非翻译区（untranslated region,UTR）内含子,但UTR内含子对疟原虫基因表达的影响与功能尚未研究。本研究中,我们构建了双荧光素酶报告基因质粒,选择约氏疟原虫5’UTR部分只含单一内含子的四个基因,通过电击穿孔将质粒转染到约氏疟原虫17XL中,利用荧光素酶报告基因分析包含和不包含内含子的5’UTR活性。我们发现其中三个基因,包含5’UTR内含子质粒的电转虫株表达量约为不包含5’UTR内含子质粒的1-3倍,这一结果表明5’UTR内含子可以增加约氏疟原虫的基因表达。我们在不同亚型的约氏疟原虫虫株中发现了一致的结果,通过电击转染编码可调控翻译肿瘤... 

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 疟疾
        1.1.1 疟疾发展现状
        1.1.2 疟原虫及其生活史
        1.1.3 疾病防治
    1.2 基因表达调控
        1.2.1 5'UTR对基因表达调控的影响
        1.2.2 内含子影响基因表达调控的研究进展
        1.2.3 疟原虫的基因表达调控
    1.3 TCTP蛋白
    1.4 研究目的与意义
第二章 5'UTR内含子对约氏疟原虫基因表达的影响
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 疟原虫虫株及实验小鼠
        2.2.2 实验试剂配制
        2.2.3 主要仪器设备
        2.2.4 双荧光素酶报告基因质粒载体的构建
        2.2.5 电击转染
        2.2.6 电转虫株鉴定
        2.2.7 荧光素酶表达量的测定
    2.3 实验结果
        2.3.1 双荧光素酶报告基因质粒的构建
        2.3.2 5'UTR内含子对不同基因表达的影响
        2.3.3 5'UTR内含子对不同虫株基因表达的影响
        2.3.4 5'UTR内含子大小与序列对基因表达的影响
    2.4 讨论
第三章 Pytctp 5'UTR内含子对基因表达的作用与功能
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验试剂配制
        3.2.2 主要仪器设备
        3.2.3 质粒构建
        3.2.4 电击转染及药物处理
        3.2.5 免疫荧光分析
        3.2.6 蛋白提取及免疫印迹
    3.3 实验结果
        3.3.1 质粒构建与电击转染虫株鉴定
        3.3.2 插入3×HA标签对疟原虫生长情况的影响
        3.3.3 5'UTR内含子对蛋白表达影响的分析
        3.3.4 敲除5'UTR内含子对疟原虫生长情况的影响
    3.4 讨论
第四章 小结
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年全国消除疟疾进展及疫情特征分析[J]. 张丽,丰俊,张少森,夏志贵,周水森.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(03)
[2]我国疟疾防治研究成就[J]. 汤林华.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 1999(05)



本文编号：3691370