大黄鱼TAK1基因与其结合蛋白TAB1和TAB2的克隆及功能研究

发布时间：2022-10-21 13:33

　　本研究根据实验室转录组数据库利用PCR技术克隆了大黄鱼（Larimichthys crocea）转化生长因子-β激活激酶1（LcTAK1）和TAK1结合蛋白1（LcTAB1）、TAK1结合蛋白2（LcTAB2）的cDNA序列,对其氨基酸序列及蛋白结构进行了预测和分析。研究了它们在大黄鱼各组织中的表达情况;检测了经病原相关分子模式（PAMP）刺激后,TAK1和TAB1、TAB2基因在大黄鱼肾细胞系（LCK）中转录水平的时空表达谱;并对三个基因进行亚细胞定位分析。此外,本研究还构建了它们的过表达重组载体,将TAK1与其结合蛋白TAB1/TAB2分别或共转染人胚胎肾细胞系293T（HEK293T）,检测不同PAMPs刺激后对NF-κB的激活及下游细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素（IL）IL-6、IL-1β、IL-8和I型干扰素（IFN-I）等基因转录水平表达的调控。主要结果如下:（1）LcTAK1与其结合蛋白TAB1、TAB2的克隆、表达分析及定位LcTAK1基因ORF为1725 bp,编码574个氨基酸（aa）,预测分子量（Mw）64.2 kDa,理论等电点（pI）6.69... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 大黄鱼简介
    1.2 研究背景概述
        1.2.1 TAK1的主要功能及研究进展
        1.2.2 TAK1结合蛋白TAB1的研究进展
        1.2.3 TAK1结合蛋白TAB2的研究进展
    1.3 本研究的目的及意义
第2章 大黄鱼TAK1与结合蛋白的克隆、表达分析及定位
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2cDNA克隆
        2.1.3 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2组织表达与刺激表达分析
        2.1.4 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2的亚细胞定位研究
    2.2 实验结果
        2.2.1 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2cDNA克隆及序列分析
        2.2.2 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2表达谱分析
        2.2.3 LcTAK1、LcTAB1、LcTAB2亚细胞定位结果
    2.3 讨论
第3章 LcTAK1与LcTAB1对NF-кB信号通路调控机制
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 大黄鱼TAK1和TAB1过表达载体构建
        3.1.3 LcTAK1和LcTAB1过表达对NF-кB启动子活性影响
        3.1.4 LcTAK1和LcTAB1过表达对细胞因子mRNA水平表达影响
    3.2 实验结果
        3.2.1 大黄鱼TAK1和TAB1过表达载体构建
        3.2.2 LcTAK1和LcTAB1过表达对NF-кB启动子活性影响
        3.2.3 LcTAK1和LcTAB1过表达对下游细胞因子mRNA水平表达影响
    3.3 讨论
第4章 LcTAK1与LcTAB2对NF-κB信号通路调控机制
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 大黄鱼TAB2过表达载体构建
        4.1.3 LcTAK1与LcTAB2过表达对NF-κB及其亚基p65启动子活性影响
        4.1.4 LcTAK1与LcTAB2过表达对下游细胞因子启动子活性影响
        4.1.5 LcTAK1与LcTAB2过表达对下游细胞因子mRNA水平表达影响
    4.2 实验结果
        4.2.1 LcTAB2过表达载体构建
        4.2.2 LcTAK1与LcTAB2过表达对NF-κB及其亚基p65启动子影响
        4.2.3 LcTAK1与LcTAB2过表达对下游细胞因子启动子活性影响
        4.2.4 LcTAK1与LcTAB2过表达对下游细胞因子mRNA水平表达影响
    4.3 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
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[3]哈维氏弧菌人工感染大黄鱼的组织病理学研究[J]. 徐晓津,徐斌,王军,苏永全,张之文,陈心.  厦门大学学报(自然科学版). 2009(02)
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本文编号：3695745