蜂毒前溶血肽原基因的改造及其原核表达

发布时间：2022-12-04 04:44

　　为进一步探讨利用基因工程技术生产蜂毒肽的方法,根据大肠杆菌密码子偏好性、基因GC含量、合成蛋白加工需求等对蜂毒前溶血肽原基因序列进行改造,并利用人工化学合成方法完成改造后全基因的合成。构建蜂毒前溶血肽原与GST融合表达重组质粒pGEX-4T-1/PPMel,转化大肠杆菌BL21感受态细胞后分别在20、37℃条件下经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,并利用SDS-PAGE和Western Blot对产物进行检测。结果表明,表达体系成功表达了目的融合蛋白,在20℃条件下可获得可溶性表达产物,为进一步分离纯化目的蛋白及获得蜂毒肽提供了基础。 

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料与主要试剂
    1.2 试验方法
        1.2.1 基因改造、合成及扩增
        1.2.2 重组质粒的构建
        1.2.3 蛋白表达
2 结果与分析
    2.1 优化后的基因序列信息
    2.2 重组质粒的酶切检测
    2.3 蛋白表达检测
3 讨论与结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]蜂毒前溶血肽原及其加工产物生物信息学比较分析[J]. 郭新军.  陕西农业科学. 2018(09)
[2]蒺藜苜蓿WRKY转录因子密码子使用偏好性分析[J]. 宋辉,王鹏飞,马登超,夏晗,赵传志,张烨,赵术珍.  农业生物技术学报. 2015(02)
[3]蜂毒肽基因在大肠杆菌中的表达、纯化及初步鉴定[J]. 朱文赫,田立玲,孙妙囡,孙德军.  中国生化药物杂志. 2010(01)
[4]4种胡蜂前溶血肽原基因的克隆与序列比较[J]. 施婉君,张素方,张传溪,程家安.  遗传学报. 2003(06)
[5]蜂毒溶血肽前体蛋白cDNA的克隆及其融合蛋白的表达[J]. 王关林,李大力,方宏筠.  微生物学报. 2001(02)
[6]蜂毒溶血肽基因的定点诱变及其在大肠杆菌中的表达[J]. 王关林,李大力,方宏筠.  遗传学报. 2000(02)



本文编号：3707624