红豆杉TcERF基因qRT-PCR体系构建与优化

发布时间：2022-12-09 05:14

　　红豆杉（Taxus sp.）能够产生天然抗癌药物紫杉醇（taxol）,但含量极低,开发与利用之间存在严重矛盾。乙烯响应因子（APETALA2/ethylene-responsive factor, AP2/ERF）对红豆杉中紫杉醇的生物合成起到重要调控作用。研究组前期获得了1个红豆杉ERF转录因子基因（命名为TcERF）,为了更好地研究该基因的功能,本研究以曼地亚红豆杉（Taxus×media）愈伤组织为实验材料,采用正交实验L9（34）方法,根据TcERF基因序列设计、组合出3对引物,从qRT-PCR反应体系、cDNA模板用量和引物用量等方面进行优化,分别筛选出该基因在5μL小反应体系及10、20μL常用体系下的最佳组合。结果表明,在本研究优化后的5μL体系下,TcERF和看家基因:3,5-表异构酶-4-还原酶（3,5-epimerase-4-reductase, TBC41）基因的扩增效率分别为90%和94%;在优化后的10μL下,TcERF和TBC41的扩增效率分别为94%和95%;在优化后的20μL下,TcERF和TBC41的扩增效率分别为102%和93%,以上各扩增体系回归系... 

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 总RNA提取和cDNA合成
    1.3 引物设计以及筛选
    1.4 实时荧光定量PCR实验设计及方案
    1.5 qRT-PCR实验
    1.6 标准曲线的绘制
    1.7 数据分析
2 结果与分析
    2.1 引物筛选
    2.2 引物TBC41和Tc F1R2的q RT-PCR正交实验
    2.3 TcERF基因qRT-PCR体系优化
    2.4 最佳qRT-PCR体系验证
3 讨论
4 结论



本文编号：3714898