异基因小鼠肝移植抑制肝外肿瘤生长及其免疫学机制

发布时间：2022-12-18 00:20

　　[目的]移植物抗肿瘤（graft versus tumor,GvT）效应是异基因造血干细胞移植（allogenic hematopoietic stem cell transplantation,alloHSCT）之后来自供者和受者的多种淋巴细胞一同参与的抑制肿瘤的效应。肝脏作为一个富含造血干细胞和淋巴细胞的器官,其移植物是否同样具有GvT效应尚未有报道。本文旨在验证异基因肝移植的GvT效应并探究其免疫学机制。[方法]我们通过构建异基因和同基因小鼠原位肝移植后肿瘤生长的动物模型,观察、测量肝移植后肿瘤的生长情况来验证异基因肝移植的GvT效应;并通过建立免疫细胞组分清除的供体小鼠模型,利用免疫荧光技术、流式细胞术、体外细胞共培养等免疫学研究常用的实验技术探究异基因肝移植GvT效应的免疫学机制。[结果]我们成功构建小鼠原位肝移植后肿瘤生长的动物模型。异基因小鼠肝移植后肝外肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤细胞凋亡增加,而心脏移植则不出现此现象。肝移植后早期供肝来源淋巴细胞浸润肿瘤,与肝移植的GvT效应有关。构建T、B细胞缺陷的供体后,异基因肝移植抗肿瘤现象消失,肿瘤浸润免疫细胞明显减少。异基因肝移... 

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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1 前言
2 异基因小鼠肝移植后肝外肿瘤生长模型的构建
    2.1 异基因小鼠原位肝移植模型的构建
    2.2 小鼠肝移植后肝外肿瘤生长模型的构建
    2.3 术后观察和肿瘤测量
    2.4 标本获取与初步处理
    2.5 统计分析
    2.6 结果
3 异基因小鼠肝移植对肝外肿瘤生长具有抑制作用
    3.1 同、异基因小鼠肝移植后肿瘤生长模型
    3.2 小鼠异位心脏移植后肿瘤生长模型
    3.3 小鼠肿瘤标本病理切片制作
    3.4 TUNEL法检测肝外肿瘤内细胞凋亡
    3.5 免疫荧光技术检测肿瘤内淋巴细胞浸润
    3.6 统计分析
    3.7 结果
4 肿瘤生长抑制与异基因肝移植后早期肿瘤内供肝来源淋巴细胞浸润有关
    4.1 C57BL/6-EGFP小鼠作供体的小鼠肝移植后肿瘤生长模型
    4.2 小鼠肝移植后延迟种植肿瘤模型
    4.3 流式细胞术检测供肝来源免疫细胞在受体内的分布
    4.4 统计分析
    4.5 结果
5 供肝来源T、B淋巴细胞通过募集受体T细胞发挥抗肿瘤作用
    5.1 预实验:免疫细胞清除的供体小鼠模型构建
    5.2 小鼠肝移植后肿瘤生长模型
    5.3 流式细胞术检测组织内免疫细胞分类
    5.4 免疫荧光技术检测肿瘤内淋巴细胞浸润
    5.5 统计分析
    5.6 结果
6 异基因肝移植后肿瘤浸润的受体T细胞活化增加
    6.1 小鼠肝移植后肿瘤生长模型
    6.2 流式细胞术检测肿瘤浸润T细胞活化情况
    6.3 统计分析
    6.4 结果
7 体外实验:异基因淋巴细胞较同基因有更强的杀伤活性
    7.1 原代淋巴细胞分离纯化
    7.2 荧光染料CFSE标记CT26肿瘤细胞
    7.3 细胞体外共培养实验
    7.4 AnnexinV法检测CT26细胞凋亡
    7.5 统计分析
    7.6 结果
8 讨论
9 结论
10 参考文献
综述
    参考文献
作者简历及在学期间所取得的科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]Overview of immunosuppression in liver transplantation[J]. Anjana A Pillai,Josh Levitsky.  World Journal of Gastroenterology. 2009(34)
[2]Review on immunosuppression in liver transplantation[J]. Maryam Moini,Michael L Schilsky,Eric M Tichy.  World Journal of Hepatology. 2015(10)
[3]Role of surgery in colorectal cancer liver metastases[J]. ?zgür Akgül, Erdin? ?etinkaya,?iyar Ers?z,Mesut Tez.  World Journal of Gastroenterology. 2014(20)
[4]Liver transplantation: Current status and challenges[J]. Caroline C Jadlowiec,Timucin Taner.  World Journal of Gastroenterology. 2016(18)



本文编号：3720945