转△-5去饱和酶基因对斑点叉尾鮰Omega-3脂肪酸的含量及其相关性状的影响

发布时间：2022-12-22 01:19

　　斑点叉尾鮰（Ictalurus punctatus）是北美最丰富的鲶鱼之一,而Omega-3脂肪酸又对健康有着不容小觑的积极影响。本研究的目的是确定β-肌动蛋白启动子驱动的马苏鲑鱼△-5去饱和酶转基因对F1转基因斑点叉尾鮰Omega-3脂肪酸产生的促进作用,F1斑点叉尾鮰是由已确认的转基因亲本繁殖的。从这些后代中获取肌肉样本,并进行脂质提取。通过气相色谱-质谱法定量测定了Omega-3脂肪酸的含量,并结合肌肉成分分析（水分,灰分,脂肪率,含水率,蛋白质含量）,确定其抗病的多效性。此外,还采用了一种新的方法,利用多种转基因来改变一条脂肪酸代谢途径中的多个步骤,这在水产养殖物种中还没有报道过。本研究利用了显微注射和CRISPR/Cas9介导的技术成功地将apo14-masousalmon-elovl2基因插入到了斑点叉尾鮰的1号染色体上,另外还监测到一条斑点叉尾鮰的2号和7号染色体上均有目的基因的插入。经脂肪酸检测与分析,由β-肌动蛋白启动子驱动的马苏鲑鱼△-5去饱和酶转基因对Omega-3脂肪酸的产生有积极的影响。F1雌性转基因斑点叉尾鮰的Omega-3脂肪酸产生率比对照斑点叉尾鮰的高2... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 引言
第二章 实验材料与方法
    2.1 转基因的构建
        2.1.1 供体β-action-elovl2 去饱和酶转基因质粒结构
        2.1.2 供体β-actin-△4 去饱和酶转基因质粒
        2.1.3 β-actin-△5_6 去饱和酶转基因质粒
        2.1.4 g RNA和 Cas9 蛋白制备
    2.2 亲本斑点叉尾鮰的处理
    2.3 显微注射
    2.4 人工授精产生子一代
    2.5 胚胎的孵化及幼鱼的养殖
    2.6 DNA的提取和PCR检验
    2.7 脂质的提取及脂肪酸的分析
    2.8 体成分分析(组分分析)
        2.8.1 水分
        2.8.2 灰分
        2.8.3 蛋白质
    2.9 数据统计与处理
第三章 实验结果
    3.1 靶向基因的插入
    3.2 转基因F1 斑点叉尾鮰的脂肪酸组成
    3.3 转基因F1 斑点叉尾鮰的Omega-3 脂肪酸的含量
    3.4 转基因F1 斑点叉尾鮰的Omage-6 脂肪酸生产
    3.5 样品上带有鱼皮对Omega-3/Omega-6 脂肪酸比例的影响
    3.6 F1 转基因斑点叉尾鮰的脂肪百分比(湿重)
    3.7 F1 转基因斑点叉尾鮰蛋白质的百分比(湿重)
    3.8 F1 转基因斑点叉尾鮰的灰份百分比(干重)
    3.9 F1 转基因斑点叉尾鮰的含水率(湿重)
    3.10 F1 转基因斑点叉尾鮰的体重
    3.11 F1 转基因斑点叉尾鮰的低溶解氧耐受性和抗病性
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
附录
    R code
    缩写表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]The big bang of genome editing technology: development and application of the CRISPR/Cas9 system in disease animal models[J]. Ming SHAO,Tian-Rui XU,Ce-Shi CHEN.  动物学研究. 2016(04)
[2]Overexpression of the phytochrome B gene from Arabidopsis thaliana increases plant growth and yield of cotton （Gossypium hirsutum）[J]. Abdul Qayyum RAO,Muhammad IRFAN,Zafar SALEEM,Idrees Ahmad NASIR,Sheikh RIAZUDDIN,Tayyab HUSNAIN.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine ＆ Biotechnology）. 2011(04)



本文编号：3723147