美国白蛾核型多角体病毒检测方法的建立及ORF72基因的研究

发布时间：2022-12-24 09:54

　　美国白蛾核型多角体病毒（Hyphantria cunea Nuclear Polyhedrosis Virus,HycuNPV）作为一种强效、无危害、专化性强和环境友好型的生防致病因子,在美国白蛾种群的持续防控中占据重要地位。本论文通过高效、快速的HycuNPV定量检测方法和ORF72基因的研究,为该病毒的持续控制提供了可行的监测方法,同时弥补了其在ORF72基因功能研究上的空白。论文研究结果如下:1.利用TaqMan探针法成功建立了实时荧光定量PCR对HycuNPV含量进行检测的方法。首先,将polh基因构建到pGEM-T-easy载体上,制备标准品质粒。然后,将标准品质粒10倍梯度稀释为1.0×10~8、1.0×10~7、1.0×10~6、1.0×10~5、1.0×10~4和1.0×10~3copies/μL 6个梯度浓度,以此为模版进行荧光定量PCR,建立标准品的扩增曲线和标准曲线。最后,通过得到的标准曲线计算出幼虫在接毒后的不同时间点其体内所含的病毒拷贝数。验证方法:以取食3.0×10~6PIB/mL浓度病毒的美国白蛾幼虫基因组DNA为模版,进行荧光定量PCR后发现,病毒在幼虫... 

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 杆状病毒概况
        1.1.1 杆状病毒简介
        1.1.2 杆状病毒的分类
        1.1.3 杆状病毒的应用概况
    1.2 美国白蛾
        1.2.1 美国白蛾生物学特性
        1.2.2 美国白蛾的发生与危害
        1.2.3 美国白蛾的防治概况
    1.3 美国白蛾核型多角体病毒
        1.3.1 美国白蛾核型多角体病毒简介及其应用
        1.3.2 美国白蛾核型多角体病毒的检测
        1.3.3 美国白蛾核型多角体病毒基因的研究
    1.4 研究目的与意义、内容及技术路线
        1.4.1 研究目的与意义
        1.4.2 主要研究内容
        1.4.3 技术路线
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 供试虫源
        2.1.2 仪器与设备
        2.1.3 试剂及缓冲液的配置
    2.2 方法
        2.2.1 HycuNPV Taq Man探针法荧光定量PCR检测方法的建立
        2.2.2 HycuNPV ORF72基因的研究
3 结果与分析
    3.1 HycuNPV Taq Man探针法荧光定量PCR检测方法的建立
        3.1.1 HycuNPV polh基因的扩增
        3.1.2 标准品质粒的制备
        3.1.3 标准曲线与扩增曲线的绘制
        3.1.4 重复性验证
        3.1.5 不同时间点幼虫体内病毒含量
    3.2 HycuNPV ORF72基因的研究
        3.2.1 HycuNPV基因组DNA的提取
        3.2.2 HycuNPV ORF72基因的扩增
        3.2.3 ORF72基因的生物信息学分析
        3.2.4 限制性内切酶对ORF72基因和pGEX-4T-1 载体质粒的双酶切
        3.2.5 HycuNPV-p GEX-4T1ORF72重组质粒表达载体的构建
        3.2.6 HycuNPV-p GEX-4T1ORF72原核表达载体的诱导表达
        3.2.7 ORF72蛋白可溶性表达的鉴定及其蛋白的纯化
4 结论与讨论
    4.1 结论
    4.2 讨论
        4.2.1 探针法荧光定量PCR检测方法的建立
        4.2.2 ORF72蛋白的诱导表达分析
致谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]驽巴贝斯虫TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 张杨,王振宝,刘世芳,瓦热斯·吐尔松,巴音查汗.  中国预防兽医学报. 2017(01)
[2]TaqMan荧光定量PCR快速检测锦鲤疱疹病毒方法的建立与应用[J]. 李涛,万译文,刘登望.  山东农业科学. 2016(07)
[3]斯氏线虫对美国白蛾幼虫取食差异性的初步研究[J]. 王春蕾.  农业开发与装备. 2016(04)
[4]荔波连蕊茶GA2ox1基因的克隆及表达分析[J]. 肖政,李纪元,范正琪,李辛雷,殷恒福.  林业科学研究. 2016(01)
[5]美国白蛾的防治方法[J]. 李娇,袁宝峰.  北京农业. 2016(03)
[6]美国白蛾的发生规律及防治措施[J]. 李修柱.  现代农业科技. 2015(19)
[7]美国白蛾核型多角体病毒对家蚕的安全性研究[J]. 刘芳芳,刘笛,孟向东,乔鲁芹.  山东林业科技. 2015(03)
[8]美国白蛾发生与防治研究综述[J]. 闫家河,刘芹,王文亮,夏明辉,赵燕,杨启萌.  山东林业科技. 2015(02)
[9]核型多角体病毒基因组学研究进展[J]. 罗辑,周国英,朱积余.  林业科学研究. 2014(04)
[10]周氏啮小蜂规模繁放及HcNPV与Bt混剂对美国白蛾的防治效果研究[J]. 徐明,王光标,王丽,张利华,徐福元.  江苏林业科技. 2014(03)

博士论文
[1]家蚕核多角体病毒（BmNPV）orf126基因的功能研究[D]. 郝碧芳.西北农林科技大学 2008
[2]美国白蛾NPV与Bt混合致病机理及其对寄主种群持续控制作用[D]. 段彦丽.中国林业科学研究院 2008
[3]美国白蛾核型多角体病毒及其感病寄主检测方法的研究[D]. 乔鲁芹.中国林业科学研究院 2007

硕士论文
[1]家蚕杆状病毒ie0基因功能的研究[D]. 张婷.浙江理工大学 2016
[2]美国白蛾防治主要技术研究及综合防治应用[D]. 岳耀鹏.南京林业大学 2012
[3]美国白蛾综合防治技术研究[D]. 高冬梅.山东农业大学 2010



本文编号：3725982