转基因成分重组酶聚合酶扩增（RPA）快速检测方法的建立
发布时间：2023-01-28 12:12
随着越来越多的转基因作物及其制品进入市场,势必会对其安全监管体系提出更高的要求。近年来恒温核酸扩增技术的快速发展促进了RPA扩增技术在转基因检测中的应用,RPA技术良好的性能、简单的操作、便捷的设备、低廉的价格,迅速引起高度关注及开发研究热潮,可以真正实现便携式的检测设备。本实验旨在利用实时荧光RPA扩增技术建立转基因作物及其产品快速检测,并为其他检测体系的建立提供参考。本研究主要有以下三部分实验构成:实验一为了实现对转基因作物及产品的初步快速筛查,通过ISAAA Briefs发布的数据分析,挑选出4种应用最广泛的转基因通用元件CaMV35s、BT、NOS、PAT,根据转基因通用元件特异性序列设计引物与探针,结合冻干粉技术建立6连管实时荧光RPA快速筛查体系。该体系具有较高的特异性和灵敏度,能有效的检出最低48拷贝数的模板。对实际样品的筛查中,筛查结果稳定可靠,在转基因成分检测中具有广泛的应用价值。实验二为了实现对转基因大豆MON89788品系检测,根据其转化体特异性序列设计引物与探针,建立了转基因大豆MON89788的RPA实时荧光检测方法,并就影响RPA扩增的关键因子,如最佳引物的...
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
1 转基因作物概述
1.1 转基因技术原理及发展现状
1.2 转基因作物的争议
1.3 转基因检测技术的研究进展
2 重组酶聚合酶扩增技术的研究及应用进展
2.1 重组酶聚合酶扩增技术的基本原理
2.2 技术发展
2.3 RPA 的技术优势与需要改善之处
2.4 应用与展望
3 本硏究的目的和意义
第2章 实时荧光RPA技术对转基因通用元件快速筛查
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验方法
2 结果与分析
2.1 实时荧光RPA引物特异性结果
2.2 检测限试验
2.3 实际样本的检测
3 讨论
4 本章小结
第3章 转基因大豆MON89788 实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立
1.材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 实验仪器
1.3 方法
2.结果与分析
2.1 实时荧光RPA引物筛选结果
2.2 实时荧光 RPA 条件优化
2.3 特异性试验
2.4 灵敏度与检测限试验
2.5 数据分析
2.6 实际样品的检测
3 讨论
4 本章小结
第4章 转基因玉米MON863 实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验方法
1.3.1 DNA 提取
1.3.2 引物和探针
1.3.3 实时PCR反应和RPA反应
1.3.4 引物的筛查
1.3.5 反应条件优化
1.3.6 特异性和灵敏度实验
1.3.7 RT-RPA用于实际样品的快速检测
2 结果和讨论
2.1 引物与探针的筛查
2.2 反应条件优化
2.3 RT-RPA的特异性和灵敏度
2.4 使用RT-RPA用于实际样品快速检测
3 讨论
4 本章小结
结论
参考文献
附录
英文缩略词表
硕士期间发表论文及科研情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]3种病原菌多重IMS-荧光RPA检测体系的建立及初步应用[J]. 李轲,郭华麟,禹建鹰,张淑霞,连素梅,徐超,韩国全,郭会清. 畜牧与兽医. 2019(03)
[2]研究植物转基因技术的必要性探讨[J]. 高新梅,逯敏慧. 现代农业科技. 2019(04)
[3]转聚合cry1A.105、cry2Ab2和cp4epsps基因抗虫耐除草剂玉米的田间抗性评价[J]. 李国平,刘冰,黄建荣,邱峰,封洪强. 植物保护. 2019(01)
[4]进口转基因粮食安全以及法律对策[J]. 孟冠奇. 吉林广播电视大学学报. 2019(01)
[5]转基因食品安全检测技术研究[J]. 邵绪卿. 现代食品. 2018(23)
[6]生物技术在农业育种中的应用探讨[J]. 郑敏. 种子科技. 2018(09)
[7]转基因育种技术与传统育种技术有什么区别?[J]. 青海农技推广. 2018(03)
[8]转基因玉米表达的Cry1Ab、PAT和EPSPS蛋白对日本通草蛉幼虫的安全风险评估[J]. 高欣欣,全玉东,王振营,白树雄,张天涛,何康来. 植物保护学报. 2018(04)
[9]等温核酸扩增技术在病原体检测中的应用[J]. 彭志,陈刚毅,刘雪飞,黄新河. 生物技术进展. 2018(04)
[10]小麦常规育种与分子育种相结合的研究[J]. 孙劲松. 农村经济与科技. 2018(12)
博士论文
[1]荧光信号放大检测技术在生物大分子检测中的研究和应用[D]. 郭秋平.湖南大学 2011
硕士论文
[1]基于LFD-RPA的核酸可视化检测技术的建立及应用[D]. 孙魁.中国人民解放军军事医学科学院 2017
[2]食品中转基因成分的定量检测研究[D]. 吴永彬.南方医科大学 2012
本文编号：3732580
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
1 转基因作物概述
1.1 转基因技术原理及发展现状
1.2 转基因作物的争议
1.3 转基因检测技术的研究进展
2 重组酶聚合酶扩增技术的研究及应用进展
2.1 重组酶聚合酶扩增技术的基本原理
2.2 技术发展
2.3 RPA 的技术优势与需要改善之处
2.4 应用与展望
3 本硏究的目的和意义
第2章 实时荧光RPA技术对转基因通用元件快速筛查
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验方法
2 结果与分析
2.1 实时荧光RPA引物特异性结果
2.2 检测限试验
2.3 实际样本的检测
3 讨论
4 本章小结
第3章 转基因大豆MON89788 实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立
1.材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 实验仪器
1.3 方法
2.结果与分析
2.1 实时荧光RPA引物筛选结果
2.2 实时荧光 RPA 条件优化
2.3 特异性试验
2.4 灵敏度与检测限试验
2.5 数据分析
2.6 实际样品的检测
3 讨论
4 本章小结
第4章 转基因玉米MON863 实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验方法
1.3.1 DNA 提取
1.3.2 引物和探针
1.3.3 实时PCR反应和RPA反应
1.3.4 引物的筛查
1.3.5 反应条件优化
1.3.6 特异性和灵敏度实验
1.3.7 RT-RPA用于实际样品的快速检测
2 结果和讨论
2.1 引物与探针的筛查
2.2 反应条件优化
2.3 RT-RPA的特异性和灵敏度
2.4 使用RT-RPA用于实际样品快速检测
3 讨论
4 本章小结
结论
参考文献
附录
英文缩略词表
硕士期间发表论文及科研情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]3种病原菌多重IMS-荧光RPA检测体系的建立及初步应用[J]. 李轲,郭华麟,禹建鹰,张淑霞,连素梅,徐超,韩国全,郭会清. 畜牧与兽医. 2019(03)
[2]研究植物转基因技术的必要性探讨[J]. 高新梅,逯敏慧. 现代农业科技. 2019(04)
[3]转聚合cry1A.105、cry2Ab2和cp4epsps基因抗虫耐除草剂玉米的田间抗性评价[J]. 李国平,刘冰,黄建荣,邱峰,封洪强. 植物保护. 2019(01)
[4]进口转基因粮食安全以及法律对策[J]. 孟冠奇. 吉林广播电视大学学报. 2019(01)
[5]转基因食品安全检测技术研究[J]. 邵绪卿. 现代食品. 2018(23)
[6]生物技术在农业育种中的应用探讨[J]. 郑敏. 种子科技. 2018(09)
[7]转基因育种技术与传统育种技术有什么区别?[J]. 青海农技推广. 2018(03)
[8]转基因玉米表达的Cry1Ab、PAT和EPSPS蛋白对日本通草蛉幼虫的安全风险评估[J]. 高欣欣,全玉东,王振营,白树雄,张天涛,何康来. 植物保护学报. 2018(04)
[9]等温核酸扩增技术在病原体检测中的应用[J]. 彭志,陈刚毅,刘雪飞,黄新河. 生物技术进展. 2018(04)
[10]小麦常规育种与分子育种相结合的研究[J]. 孙劲松. 农村经济与科技. 2018(12)
博士论文
[1]荧光信号放大检测技术在生物大分子检测中的研究和应用[D]. 郭秋平.湖南大学 2011
硕士论文
[1]基于LFD-RPA的核酸可视化检测技术的建立及应用[D]. 孙魁.中国人民解放军军事医学科学院 2017
[2]食品中转基因成分的定量检测研究[D]. 吴永彬.南方医科大学 2012
本文编号：3732580
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3732580.html
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