颠茄根中定位表达rol基因对托品烷生物碱合成的影响

发布时间：2024-09-17 12:35

　　托品烷生物碱(Tropane alkaloids,TAs)是在临床上常用的一类抗胆碱药物,在镇痛、麻醉、抗晕动病、戒毒、帕金森氏病、农药中毒等治疗方面有良好的作用。目前托品烷生物碱主要从天然植物颠茄(Atropa belladonna)、曼陀罗(Datura stramonium)、山莨菪(Anisodus tanguticus)等植物中提取,市场需求巨大,工业合成的成本较高。颠茄是被中国药典收录,主要提供托品烷生物碱的商业药源植物,天然的颠茄中托品烷类生物碱的含量很低,利用基因代谢工程来提高颠茄中的托品烷生物碱的含量具有很好的研究意义。本研究通过颠茄基因组DNA克隆得到药用植物颠茄下游关键酶基因启动子H6H-p;从C58C1发根农杆菌pRiA4质粒上克隆得到rolC基因。将rolC基因克隆构建至pBI121的GUS编码区获得CaMV35S驱动的表达载体;同样地,以pBI121为表达载体,H6H-p为组织定位启动子与rolC基因进行载体构建,获得H6H-p驱动的rolC基因定位表达载体;进行转化获取得到EHA105-pBI121-CaMV35S-rolC和EHA105-pBI121-H6...

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图1-1莨菪碱分子结构

莨菪碱,亦称为天仙子碱,它首先是从传统中草药天仙子、洋金花中分离而得到的颠茄生物碱之一,其分子结构是由莨菪醇和莨菪酸缩合而生成的酯(如图1-1)。呈现出白色结晶性粉末,无臭,有苦辣味。易产生消旋,水溶液呈碱性,在乙醇和稀酸中极易溶解,在氯仿、水、乙醚和苯中可溶。莨菪碱主要存在于茄....

图1-2山莨菪碱分子结构

山莨菪碱(Anisodamine),是我国学者从茄科植物唐古特山莨菪(Anisodustanguticus(Maxim.)Pascher)的根中提取出来的一种莨菪烷类生物碱(覃纲等,2010);外形为白色结晶或结晶性粉末,无臭,极易溶于水,在乙醇中易溶。分子式为C17H23NO....

图1-3托品烷类生物碱合成途径(强玮等,2016)

1.1.4托品烷生物碱合成途径研究进展托品烷生物碱在茄科植物中的合成途经已经明确(如图1-3),主要起始于鸟氨酸和精氨酸的脱羧,然后由合成途径上游的第一个关键酶N-甲基腐胺转移酶(PMT)(SuzukiKetal,1999),催化生成托品烷生物碱的合成前体物质N-甲基腐胺....

图3-1H6H-p启动子序列全长

通过VectorNITexplorer软件分析,获取H6H-p启动子序列全长,如图3-1,H6H-p全长为1100bp,起始密码子是ATG。3.1.2rolC基因生物信息学分析

本文编号：4005463