3个microRNA及靶基因在刺参盐度适应中的作用

发布时间：2023-01-31 07:20

　　盐度是影响刺参Apostichopus japonicus养殖中最常见的非生物因素,是限制刺参养殖行业稳定发展的主要因素。低盐胁迫是刺参养殖过程中经常面临的问题,为了更好地提高刺参养殖业的经济效益和社会效益,研究刺参在低盐下的适应机制是不可或缺的。微小RNA（miRNA）是长度为18~25个核苷酸的内源性非编码小RNA,在生物体的生命活动过程中具有调节功能,通过转录后抑制靶基因mRNA的翻译或降解mRNA从而起到响应环境影响的作用。本研究课题组构建了刺参各组织在18 psu处理6h的小RNA文库和转录组cDNA文库并进行了高通量测序,获得了差异表达的miRNAs和靶基因,并对其靶基因进行了预测。本研究在高通量测序中获得的刺参盐度胁迫相关miRNAs和靶基因的基础上,从中选取3个miRNA（miR-2008、miR-278-3p、miR-92a）及对应的靶基因,通过对其在体外和刺参体内的表达模式进行分析,获得miRNA及靶基因在刺参盐度胁迫过程中发挥的作用,为刺参的盐度适应机制提供数据支持。研究成果如下:（1）从刺参盐度胁迫后的转录组数据库表达谱中筛选出4个差异表达的基因,包括:单羧酸转... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 miRNA概述
    1.2 参与水产动物环境胁迫应答的基因或者miRNA
    1.3 参与水产动物盐度适应的基因
    1.4 参与水产动物盐度胁迫应答的miRNA
    1.5 参与刺参盐度应答的基因
第二章 盐度应激下刺参4个转运相关基因的适应表达研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
        2.1.3 引物设计与筛选
        2.1.4 RNA的提取
        2.1.5 荧光定量PCR检测基因表达
    2.2 结果
        2.2.1 低盐胁迫下SLC16a13 基因在刺参中的表达
        2.2.2 低盐胁迫下SLC6a8 基因在刺参各组织中的表达差异
        2.2.3 低盐胁迫下刺参不同组织中FIBCD1 基因的差异表达
        2.2.4 低盐胁迫下Gria1 基因在刺参各组织中的差异表达
    2.3 讨论
        2.3.1 低盐胁迫下的单羧酸转运蛋白家族16a13 基因在刺参中的表达
        2.3.2 低盐胁迫下的单羧酸转运蛋白家族6a8 基因在海参中的表达
        2.3.3 低盐胁迫下的谷氨酸离子受体AMPA型亚基1 基因在刺参各组织中的表达
        2.3.4 低盐胁迫下的甲壳素受体蛋白基因在刺参各组织中的表达
    2.4 小结
第三章 miR-2008 及靶基因PLEKHA3 表达分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 主要试剂及仪器
        3.1.3 引物
        3.1.4 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 差异表达的6个miR-2008 及靶基因的PCR验证
        3.2.2 miR-2008 及靶基因PLEKHA3 在低盐胁迫下的表达
        3.2.3 miRNA及 PLEKHA3在miR-2008 干扰后体腔细胞中的表达
        3.2.4 miR-2008 过表达后刺参在盐胁下miRNA及 PLEKHA3 表达
        3.2.5 miR-2008 干扰对盐度胁迫刺参离子浓度、渗透压产生的影响
        3.2.6 miR-2008 干扰对盐胁刺参呼吸树酶活的影响
        3.2.7 将SIPLEKHA3 导入刺参后miRNA及 PLEKHA3 的表达
        3.2.8 PLEKHA3 干扰对盐度胁迫刺参ROS的影响
        3.2.9 PLEKHA3 干扰对盐胁刺参离子浓度、渗透压的影响
        3.2.10 PLEKHA3 干扰对活体刺参呼吸树酶活产生的影响
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 miR-92a和 miR-278-3p靶基因的功能验证
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 主要试剂及仪器
        4.1.3 引物
        4.1.4 实验方法
    4.2 结果
        4.2.1 mi R-92a及靶基因PLSCR2 在低盐胁迫下刺参体腔细胞中的表达
        4.2.2 miR-278-3p及靶基因Htr2b在低盐胁迫下刺参体腔细胞中的表达
        4.2.3 miRNA及 PLSCR2在miR-92a干扰后体腔细胞中的表达
        4.2.4 miRNA及 Htr2b在 miR-278-3p干扰后体腔细胞中的表达
    4.3 讨论
        4.3.1 miR-92a和靶基因PLSCR2 在刺参上的功能分析
        4.3.2 miR-278-3p和靶基因Htr2b在刺参上的功能分析
    4.4 小结
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[7]凡纳滨对虾和三疣梭子蟹渗透调节相关基因的筛选与表达分析[D]. 胡岩岩.中国海洋大学 2012



本文编号：3733808