CRISPR/Cas13系统敲减HEK293T细胞ku70和lig4基因表达

发布时间：2023-02-12 14:57

　　成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associatedproteins,Cas)系统是目前基因编辑、基因表达研究的热点,其中靶向RNA的CRISPR/Cas13系统的开发为RNA的干扰和编辑提供了新的方向。文中针对HEK293T细胞非同源末端连接(Nonhomologousendjoining,NHEJ)通路修复关键因子Ku70和Lig4的编码序列,设计并合成CRISPR/Cas13a、b系统相应的gRNA,检测其对ku70和lig4基因表达的影响。结果显示,Cas13a对ku70和lig4的RNA敲减效果可以达到50%以上,Cas13b对ku70和lig4的RNA敲减效果分别达到92%和76%;同时Cas13a、b系统能将Ku70和Lig4蛋白水平分别下调至68%和53%。CRISPR/Cas13系统可有效敲减HEK293T细胞RNA和蛋白质表达,为基因功能和调控研究提供一种新的策略。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 Cas13a、b系统构建
    1.3 细胞培养与传代
    1.4 实时荧光定量PCR检测Cas13a、b系统对mRNA的干扰效果
    1.5 Cas13a、b系统的转染效率
    1.6 Western blotting检测目的基因的蛋白水平
    1.7 统计分析
2 结果与分析
    2.1 Cas13a、b系统构建
    2.2 Cas13a、b系统对ku70和lig4基因mRNA水平的影响
    2.3 Cas13a、b系统转染效率评估
    2.4 Cas13a、b系统对Ku70和Lig4蛋白水平的影响
3 讨论



本文编号：3741310