龙眼SPS基因克隆及其表达分析

发布时间：2023-02-19 17:53

　　【目的】克隆龙眼蔗糖磷酸合成酶基因(DlSPS)并分析其表达特性,为深入探究SPS基因家族成员在植物生长发育过程中的调控机制提供理论依据。【方法】以石硖龙眼为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆DlSPS基因,对其进行生物信息学分析,并用实时荧光定量PCR检测龙眼不同组织[根、茎、叶、幼果、果皮、花、熟果(果肉和果皮)]的相对表达量;测定分析果实发育过程中蔗糖含量、SPS活性及DlSPS基因表达的相关性。【结果】克隆获得的DlSPS基因(GenBank登录号为KP769779)cDNA全长3504 bp,编码1057个氨基酸残基,其编码蛋白分子量118.38 kD,理论等电点6.09,脂溶指数85.53,不稳定系数43.69,亲/疏水性平均值-0.412,为不稳定的亲水蛋白。DlSPS蛋白与温州蜜桔(BAA23213.1)SPS蛋白同源性最高,聚在同一小分支上,表明二者亲缘关系较近。DlSPS蛋白二级结构中,α-螺旋占35.0%,延伸链占13.8%,无规则卷曲占51.2%,与其三级结构预测结果相符。DlSPS基因在不同组织中均有表达,但表达量存在明显差异,其中在叶中的表达量显著高于...

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【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 植物材料
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器设备
    1.2 试验方法
        1.2.1 总RNA提取与cDNA第一链合成
        1.2.2 基因克隆
        1.2.3 生物信息学分析
        1.2.4 实时荧光定量PCR检测
        1.2.5 果实蔗糖含量测定
        1.2.6 SPS活性测定
    1.3 数据处理与作图
2 结果与分析
    2.1 DlSPS基因克隆结果
    2.2 DlSPS基因的核苷酸序列分析结果及基因家族鉴定
    2.3 DlSPS蛋白理化性质预测分析结果
        2.3.1 DlSPS蛋白亲/疏水性预测预测结果
        2.3.2 系统发育进化树分析结果
        2.3.3 DlSPS蛋白质二级和三级结构预测
    2.4 DlSPS基因组织表达特性分析结果
    2.5 龙眼果实蔗糖含量与SPS的相关性分析结果
3 讨论
4 结论



本文编号：3746686