杉木ClKptA/Tpt1基因的功能研究
发布时间：2023-02-26 08:32
KptA/Tpt1是广泛存在于生物中的一种磷酸转移酶,其功能是在tRNA的剪接过程中将磷酸基团转移到NAD+上,进而形成ADP-核糖基化。磷不但是核酸合成、植物生长、发育所必须的大量元素,而且是重要的信号分子。除此之外,磷可影响植物木质素的生物合成,通过改变磷的含量可以改变植物木质素的含量和木材密度。杉木(Cunninghamia lanceolate(Lamb.)Hook)是我国南方主要的用材树种,因其材性优良而深受人们喜爱。然而,杉木ClKptA/Tpt1基因目前尚未被克隆,磷是否可调控该基因的表达进而影响木质素的生物合成仍不清楚。因此,本论文基于磷处理后的杉木转录组数据,克隆了ClKptA/7pt1基因,主要研究了以下内容:(1)基于杉木转录组数据,克隆了杉木磷酸转移酶ClKptA/Tpt1基因。结果表明ClKptA/Tpt1基因CDS长1143 bp,编码381个氨基酸。通过氨基酸序列比对发现,该蛋白有很强的保守性,存在特征性HGT motif。功能结构域分析发现,KptA/TpJ1基因从原核生物到真核生物普遍存在PTS-2-RNA superfamily亚家族功能结构域。跨膜...
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 引言
1.2 木质素生物合成国内外研究进展
1.2.1 木质素的化学结构
1.2.2 木质素生物合成途径关键酶基因的研究进展
1.3 磷对植物生长发育的研究进展
1.3.1 植物对低磷胁迫的分子响应机制
1.3.2 磷对植物木质素生物合成的影响
1.4 KptA/Tpt1基因的研究进展
1.4.1 KptA/Tpt1基因家族的进化史
1.4.2 KptA/Tpt1基因家族的结构
1.4.3 KptA/Tpt1基因的功能
1.5 本文研究的工作设想
1.5.1 研究的目的和意义
1.5.2 研究的内容和技术路线
第2章 ClKptA/Tpt1基因的克隆和生物信息学分析
2.1 材料
2.2 方法
2.2.1 杉木RNA的提取
2.2.2 杉木cDNA第一链的合成
2.2.3 目的基因的克隆以及回收
2.2.4 DH5α感受态的制备
2.2.5 ClKptA/Tpt1目的基因片段与载体的连接
2.2.6 连接产物的转化
2.2.7 ClKptA/Tpt1的生物信息学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 ClKptA/Tpt1基因的克隆
2.3.2 CLKptA/Tpt1基因的生物信息学分析
2.4 小结
第3章 ClKptA/Tpt1基因表达模式的研究以及启动子的克隆
3.1 材料
3.2 方法
3.2.1 不同浓度磷处理杉木及木质素的提取
3.2.2 定量PCR分析
3.2.3 间苯三酚染色
3.2.4 染色体步移扩增的原理以及步骤
3.2.5 启动子序列分析
3.2.6 PCKplA/Tpt1::GUS表达载体的构建
3.2.7 农杆菌EH105感受态细胞的制备
3.2.8 电击法转化农杆菌感受态细胞
3.2.9 PClKptA/Tpt1::GUS杨树的转化
3.2.10 ClKptA/Tpt1亚细胞定位表载体引物设计
3.3 结果与分析
3.4 小结
第4章 ClKptA/Tpt1基因的功能研究
4.1 材料
4.2 方法
4.2.0 ClKptA/Tpt1基因原核表达载体的构建
4.2.1 杉木ClKptA/Tpt1基因过表达载体的构建
4.2.2 大肠杆菌BL21(star)感受态的制备
4.2.3 大肠杆菌BL21(star)转化
4.2.4 ClKptA/Tpt1基因的原核表达
4.2.5 ClKptA/Tpt1目的蛋白的纯化及酶活测定
4.2.6 ClKptA/Tpt1基因阳性工程菌重组质粒的提取
4.2.7 农杆菌EH105感受态细胞制备
4.2.8 电击法转化农杆菌感受态细胞
4.2.9 农杆菌介导的杨树转化
4.2.10 杨树DNA的提取
4.2.11 转基因杨树RNA的提取
4.3 结果与分析
4.4 小结
第5章 结论与讨论
5.1 结论
5.2 讨论
参考文献
附录 攻读学位期间发表的学术论文
致谢
本文编号：3750199
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 引言
1.2 木质素生物合成国内外研究进展
1.2.1 木质素的化学结构
1.2.2 木质素生物合成途径关键酶基因的研究进展
1.3 磷对植物生长发育的研究进展
1.3.1 植物对低磷胁迫的分子响应机制
1.3.2 磷对植物木质素生物合成的影响
1.4 KptA/Tpt1基因的研究进展
1.4.1 KptA/Tpt1基因家族的进化史
1.4.2 KptA/Tpt1基因家族的结构
1.4.3 KptA/Tpt1基因的功能
1.5 本文研究的工作设想
1.5.1 研究的目的和意义
1.5.2 研究的内容和技术路线
第2章 ClKptA/Tpt1基因的克隆和生物信息学分析
2.1 材料
2.2 方法
2.2.1 杉木RNA的提取
2.2.2 杉木cDNA第一链的合成
2.2.3 目的基因的克隆以及回收
2.2.4 DH5α感受态的制备
2.2.5 ClKptA/Tpt1目的基因片段与载体的连接
2.2.6 连接产物的转化
2.2.7 ClKptA/Tpt1的生物信息学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 ClKptA/Tpt1基因的克隆
2.3.2 CLKptA/Tpt1基因的生物信息学分析
2.4 小结
第3章 ClKptA/Tpt1基因表达模式的研究以及启动子的克隆
3.1 材料
3.2 方法
3.2.1 不同浓度磷处理杉木及木质素的提取
3.2.2 定量PCR分析
3.2.3 间苯三酚染色
3.2.4 染色体步移扩增的原理以及步骤
3.2.5 启动子序列分析
3.2.6 PCKplA/Tpt1::GUS表达载体的构建
3.2.7 农杆菌EH105感受态细胞的制备
3.2.8 电击法转化农杆菌感受态细胞
3.2.9 PClKptA/Tpt1::GUS杨树的转化
3.2.10 ClKptA/Tpt1亚细胞定位表载体引物设计
3.3 结果与分析
3.4 小结
第4章 ClKptA/Tpt1基因的功能研究
4.1 材料
4.2 方法
4.2.0 ClKptA/Tpt1基因原核表达载体的构建
4.2.1 杉木ClKptA/Tpt1基因过表达载体的构建
4.2.2 大肠杆菌BL21(star)感受态的制备
4.2.3 大肠杆菌BL21(star)转化
4.2.4 ClKptA/Tpt1基因的原核表达
4.2.5 ClKptA/Tpt1目的蛋白的纯化及酶活测定
4.2.6 ClKptA/Tpt1基因阳性工程菌重组质粒的提取
4.2.7 农杆菌EH105感受态细胞制备
4.2.8 电击法转化农杆菌感受态细胞
4.2.9 农杆菌介导的杨树转化
4.2.10 杨树DNA的提取
4.2.11 转基因杨树RNA的提取
4.3 结果与分析
4.4 小结
第5章 结论与讨论
5.1 结论
5.2 讨论
参考文献
附录 攻读学位期间发表的学术论文
致谢
本文编号：3750199
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