RNF213基因在胶质瘤发病中的作用及机制研究

发布时间：2023-03-04 19:25

　　胶质瘤占颅脑肿瘤的40%⁵0%,是最常见的颅内恶性肿瘤。由于胶质瘤生长部位特殊,且具有快速生长、肿瘤内部高度异质性等特征,其治疗手段有限、预后生存较差、死亡率较高,目前仍是神经外科的一大难题。环指蛋白213(Ring finger protein,RNF213)是一个分子量为519 kDa的锌指蛋白,具有AAA+ATPase和E3 ligase结构域。研究发现RNF213基因与烟雾病发病相关,并且有促进血管生成和蛋白泛素化等功能。但是RNF213在肿瘤中作用报道较少。仅有部分研究发现RNF213基因在肝癌、胰腺癌、胃癌等癌症中发生基因突变。并且有研究提示RNF213与胶质瘤发病可能有关系,但是其具体功能及分子机制不明确。在本研究中,我们检测胶质瘤临床标本发现RNF213在胶质瘤组织中表达量较低,而在癌旁组织和正常脑组织中RNF213的表达相对较高。生存期分析表明RNF213表达越低,胶质瘤患者5年生存率越低。免疫组化技术检测进一步证实RNF213在胶质瘤组织中表达呈阴性或者弱阳性,而在癌旁组织中表达呈强阳性。该结果提示RNF213基因在胶质瘤发病及进展中可能有重要...

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩略词
第1章 引言
    1.1 胶质瘤临床研究概述
        1.1.1 胶质瘤分类
        1.1.2 胶质瘤治疗及预后
        1.1.3 胶质瘤发病原因
        1.1.4 胶质瘤发病信号机制
    1.2 环指蛋白
        1.2.1 环指结构域
        1.2.2 环指结构域功能
    1.3 环指蛋白213
        1.3.1 RNF213结构
        1.3.2 RNF213与脑部疾病
        1.3.3 RNF213与肿瘤形成的关系
        1.3.4 RNF213与脑部肿瘤的关系
    1.4 RNF213相关信号调控
    1.5 MAPK信号通路与胶质瘤发生
        1.5.1 MAPK信号概述
        1.5.2 JNKs信号与胶质瘤关系
    1.6 结语
第2章 RNF213基因在胶质母细胞瘤发病中的功能研究
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 细胞株及质粒
        2.2.2 主要仪器
        2.2.3 主要试剂
        2.2.4 主要溶液配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养相关操作
        2.3.2 总RNA提取
        2.3.3 cDNA第一链合成
        2.3.4 荧光定量PCR检测
        2.3.5 RNF213基因合成
        2.3.6 质粒DNA提取及定量
        2.3.7 慢病毒表达质粒pCDH-RNF213构建
        2.3.8 过表达RNF213基因的慢病毒颗粒制备
        2.3.9 慢病毒颗粒感染细胞
        2.3.10 慢病毒颗粒滴度测定
        2.3.11 稳转细胞株构建
        2.3.12 RNF213干扰相关操作
        2.3.13 蛋白质提取及浓度测定
        2.3.14 CCK8法检测细胞增殖
        2.3.15 Colony formation实验检测细胞克隆形成
        2.3.16 Wound scratch healing实验检测细胞迁移
        2.3.17 Transwell法检测细胞侵袭
        2.3.18 FITC法检测细胞凋亡
        2.3.19 PI染色法检测细胞周期
        2.3.20 免疫组化实验检测目的基因临床相关性
        2.3.21 组织芯片图像采集及分析评价
        2.3.22 Western blotting分析
        2.3.23 体内成瘤实验
        2.3.24 基因表达谱芯片检测及分析
        2.3.25 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 RNF213基因在GBM临床样本中表达检测
        2.4.2 RNF213基因在胶质瘤细胞系中呈中丰度表达
        2.4.3 RAF213基因敲减验证
        2.4.4 RNF213敲减促进胶质瘤细胞增殖
        2.4.5 RNF213对胶质瘤细胞克隆形成影响
        2.4.6 RNF213对细胞侵袭行为影响
        2.4.7 RNF213敲减促进胶质瘤细胞迁移
        2.4.8 RAF213敲减抑制胶质瘤细胞凋亡
        2.4.9 RNF213基因对细胞周期分布的影响
        2.4.10 敲减RNF213基因促进胶质瘤体内生长
        2.4.11 过表达RNF213抑制细胞增殖
        2.4.12 过表达RNF213抑制细胞侵袭
        2.4.13 过表达RNF213促进细胞凋亡
    2.5 讨论
    2.6 实验结论
第3章 RNF213基因在胶质母细胞瘤发病中的分子机制研究
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 细胞株及质粒
        3.2.2 主要仪器
        3.2.3 主要试剂
        3.2.4 主要溶液配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养相关操作
        3.3.2 总RNA提取
        3.3.3 cDNA第一链合成
        3.3.4 荧光定量PCR检测
        3.3.5 质粒DNA提取及定量
        3.3.6 过表达RNF213基因的慢病毒颗粒制备
        3.3.7 慢病毒颗粒感染细胞
        3.3.8 慢病毒颗粒滴度测定
        3.3.9 蛋白质提取及浓度测定
        3.3.10 免疫共沉淀实验
        3.3.11 CCK8法检测细胞增殖
        3.3.12 Wound scratch healing实验检测细胞迁移
        3.3.13 Transwell法检测细胞侵袭
        3.3.14 Western blotting分析
        3.3.15 基因表达谱芯片检测及分析
        3.3.16 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 基因表达谱芯片检测RNF213基因下游应答基因
        3.4.2 RNF213调控MAPK/JNK信号通路
        3.4.3 免疫共沉淀实验检测与RNF213互作蛋白
        3.4.4 RNF213对MAPK/JNK信号调控依赖SOCS1
        3.4.5 SOCS1参与调控RNF213对细胞增殖效应
        3.4.6 SOCS1参与调控RNF213对细胞侵袭影响
    3.5 讨论
    3.6 实验结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
文献综述
    参考文献



本文编号：3754857