截干对银杏类黄酮代谢及相关调控基因的影响
发布时间：2023-03-04 19:49
银杏叶片中含有丰富的黄酮类化合物,但随着树龄的增加,叶片中黄酮类化合物含量逐渐降低,生产实践中一般采用截干措施来提高银杏叶黄酮类化合物含量。R2R3-MYB转录因子作为MYB基因家族中最大的一类家族,同样参与银杏类黄酮代谢的调控。因此,研究截干对银杏叶类黄酮代谢途径的影响,探索截干处理下调控类黄酮代谢相关R2R3-MYB转录因子差异表达有重要意义。本研究通过对银杏嫁接苗(嫁接成功后生长一年)进行截干处理,研究了生长周期内银杏叶片总黄酮苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素含量的动态变化规律,以及黄酮类化合物总还原力、自由基清除率的变化规律。为了更准确测定基因表达量,在筛选适合本研究最佳内参基因的基础上,进一步研究了截干处理下银杏类黄酮代谢途径中的9个关键酶结构基因(GbPAL、GbC4H、Gb4CL、GbCHS、GbF3H、GbFLS、GbDFR、GbANS、GbUFGT)表达水平的变化。基于银杏基因组信息开展了R2R3-MYB基因家族的鉴定与分析,通过转录组学测序技术,筛选了截干后与类黄酮相关的GbR2R3-MYB基因。获得了2个潜在的GbR2R3-MYB基因(Gb＿22884和Gb＿3985...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
第一章 前言
1.1 银杏简介
1.2 植物类黄酮代谢调控
1.2.1 植物类黄酮代谢调控途径中的结构基因
1.2.2 植物类黄酮代谢调控途径中的调控基因
1.2.3 植物中R2R3-MYB基因家族研究现状
1.3 银杏中类黄酮代谢调控
1.3.1 银杏中参与类黄酮代谢调控途径的相关基因
1.3.2 影响银杏叶黄酮类化合物积累因子
1.4 截干对植物生长及基因表达的影响
1.5 本研究的目的意义及技术路线
1.5.1 目的及意义
1.5.2 技术路线
第二章 截干对银杏黄酮类化合物及其抗氧化性的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 试验试剂
2.1.3 试验仪器
2.1.4 试验方法
2.1.4.1 银杏叶总黄酮苷含量的测定
2.1.4.2 银杏叶总还原力的测定
2.1.4.3 银杏叶自由基清除率的测定
2.2 结果与分析
2.2.1 标准曲线的制定
2.2.2 截干对银杏叶槲皮素含量的影响
2.2.3 截干对银杏叶山柰酚含量的影响
2.2.4 截干对银杏叶异鼠李素含量的影响
2.2.5 截干对银杏叶总黄酮苷含量的影响
2.2.6 截干对银杏叶黄酮类提取物抗氧化能力的影响
2.3 讨论
第三章 截干对银杏类黄酮代谢相关酶基因表达的影响
3.1 试验材料与仪器
3.1.1 植物材料
3.1.2 试验仪器与试剂
3.2 试验方法
3.2.1 银杏叶总RNA的提取
3.2.2 银杏叶第一链cDNA的合成
3.2.3 目的基因引物设计
3.2.4 内参基因的筛选
3.2.5 相关酶基因结构分析及染色体定位分析
3.2.6 实时荧光定量PCR
3.3 结果与分析
3.3.1 银杏RNA提取与质量检测
3.3.2 内参基因及关键酶基因引物特异性分析
3.3.3 候选内参基因表达谱分析
3.3.4 候选基因的稳定性表达分析
3.3.4.1 ge Norm软件分析
3.3.4.2 Norm Finder软件分析
3.3.4.3 Best Keeper软件分析
3.3.5 候选内参基因的可靠性评价
3.3.6 相关酶基因结构分析及染色体定位分析
3.3.7 截干对银杏相关结构基因表达水平分析
3.4 讨论
第四章 银杏类黄酮相关R2R3-MYB基因筛选及功能分析
4.1 植物材料
4.2 试验试剂
4.3 试验仪器
4.4 试验方法
4.4.1 银杏转录组测序分析
4.4.2 银杏R2R3-MYB基因家族的分析
4.4.2.1 银杏R2R3-MYB基因家族的鉴定
4.4.2.2 银杏R2R3-MYB基因家族染色体定位分析
4.4.2.3 银杏R2R3-MYB基因家族的序列分析
4.4.2.4 银杏R2R3-MYB基因家族时空表达模式分析
4.4.3 银杏Gb22884和Gb39852基因的克隆及转化
4.4.3.1 银杏Gb22884和Gb39852基因引物设计及克隆
4.4.3.2 目的片段与验证载体连接及连接产物的转化验证
4.4.3.3 过表达载体的连接与验证
4.4.3.4 拟南芥的种植及种子的收集
4.4.3.5 农杆菌介导的拟南芥转化
4.4.3.6 转基因植株的筛选及检测
4.5 结果与分析
4.5.1 银杏Gb R2R3-MYB基因家族分析
4.5.1.1 银杏Gb R2R3-MYB基因家族染色体定位分析
4.5.1.2 银杏Gb R2R3-MYB基因家族保守基序预测
4.5.1.3 银杏Gb R2R3-MYB基因家族结构分析
4.5.1.4 银杏Gb R2R3-MYB基因家族时空表达模式分析
4.5.2 截干处理对银杏叶片相关基因表达的影响
4.5.2.1 银杏叶RNA-Seq与序列比对
4.5.2.2 截干对银杏叶基因差异表达分析
4.5.2.3 截干对银杏差异表达基因的功能富集分析
4.5.2.4 截干对银杏类黄酮相关结构基因差异表达分析
4.5.2.5 截干对银杏Gb R2R3-MYB基因差异表达分析
4.5.3 银杏Gb22884和Gb39852基因的筛选及遗传转化
4.5.3.1 银杏Gb22884和Gb39852基因的筛选及差异表达分析
4.5.3.2 银杏Gb22884和Gb39852基因的克隆转化分析
4.5.3.3 银杏Gb22884和Gb39852基因的遗传转化
4.5.3.4 转基因植株的筛选及检测
4.6 讨论
第五章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
攻读学位期间发表的学术论文
参考文献
本文编号：3754894
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
abstract
第一章 前言
1.1 银杏简介
1.2 植物类黄酮代谢调控
1.2.1 植物类黄酮代谢调控途径中的结构基因
1.2.2 植物类黄酮代谢调控途径中的调控基因
1.2.3 植物中R2R3-MYB基因家族研究现状
1.3 银杏中类黄酮代谢调控
1.3.1 银杏中参与类黄酮代谢调控途径的相关基因
1.3.2 影响银杏叶黄酮类化合物积累因子
1.4 截干对植物生长及基因表达的影响
1.5 本研究的目的意义及技术路线
1.5.1 目的及意义
1.5.2 技术路线
第二章 截干对银杏黄酮类化合物及其抗氧化性的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 试验试剂
2.1.3 试验仪器
2.1.4 试验方法
2.1.4.1 银杏叶总黄酮苷含量的测定
2.1.4.2 银杏叶总还原力的测定
2.1.4.3 银杏叶自由基清除率的测定
2.2 结果与分析
2.2.1 标准曲线的制定
2.2.2 截干对银杏叶槲皮素含量的影响
2.2.3 截干对银杏叶山柰酚含量的影响
2.2.4 截干对银杏叶异鼠李素含量的影响
2.2.5 截干对银杏叶总黄酮苷含量的影响
2.2.6 截干对银杏叶黄酮类提取物抗氧化能力的影响
2.3 讨论
第三章 截干对银杏类黄酮代谢相关酶基因表达的影响
3.1 试验材料与仪器
3.1.1 植物材料
3.1.2 试验仪器与试剂
3.2 试验方法
3.2.1 银杏叶总RNA的提取
3.2.2 银杏叶第一链cDNA的合成
3.2.3 目的基因引物设计
3.2.4 内参基因的筛选
3.2.5 相关酶基因结构分析及染色体定位分析
3.2.6 实时荧光定量PCR
3.3 结果与分析
3.3.1 银杏RNA提取与质量检测
3.3.2 内参基因及关键酶基因引物特异性分析
3.3.3 候选内参基因表达谱分析
3.3.4 候选基因的稳定性表达分析
3.3.4.1 ge Norm软件分析
3.3.4.2 Norm Finder软件分析
3.3.4.3 Best Keeper软件分析
3.3.5 候选内参基因的可靠性评价
3.3.6 相关酶基因结构分析及染色体定位分析
3.3.7 截干对银杏相关结构基因表达水平分析
3.4 讨论
第四章 银杏类黄酮相关R2R3-MYB基因筛选及功能分析
4.1 植物材料
4.2 试验试剂
4.3 试验仪器
4.4 试验方法
4.4.1 银杏转录组测序分析
4.4.2 银杏R2R3-MYB基因家族的分析
4.4.2.1 银杏R2R3-MYB基因家族的鉴定
4.4.2.2 银杏R2R3-MYB基因家族染色体定位分析
4.4.2.3 银杏R2R3-MYB基因家族的序列分析
4.4.2.4 银杏R2R3-MYB基因家族时空表达模式分析
4.4.3 银杏Gb22884和Gb39852基因的克隆及转化
4.4.3.1 银杏Gb22884和Gb39852基因引物设计及克隆
4.4.3.2 目的片段与验证载体连接及连接产物的转化验证
4.4.3.3 过表达载体的连接与验证
4.4.3.4 拟南芥的种植及种子的收集
4.4.3.5 农杆菌介导的拟南芥转化
4.4.3.6 转基因植株的筛选及检测
4.5 结果与分析
4.5.1 银杏Gb R2R3-MYB基因家族分析
4.5.1.1 银杏Gb R2R3-MYB基因家族染色体定位分析
4.5.1.2 银杏Gb R2R3-MYB基因家族保守基序预测
4.5.1.3 银杏Gb R2R3-MYB基因家族结构分析
4.5.1.4 银杏Gb R2R3-MYB基因家族时空表达模式分析
4.5.2 截干处理对银杏叶片相关基因表达的影响
4.5.2.1 银杏叶RNA-Seq与序列比对
4.5.2.2 截干对银杏叶基因差异表达分析
4.5.2.3 截干对银杏差异表达基因的功能富集分析
4.5.2.4 截干对银杏类黄酮相关结构基因差异表达分析
4.5.2.5 截干对银杏Gb R2R3-MYB基因差异表达分析
4.5.3 银杏Gb22884和Gb39852基因的筛选及遗传转化
4.5.3.1 银杏Gb22884和Gb39852基因的筛选及差异表达分析
4.5.3.2 银杏Gb22884和Gb39852基因的克隆转化分析
4.5.3.3 银杏Gb22884和Gb39852基因的遗传转化
4.5.3.4 转基因植株的筛选及检测
4.6 讨论
第五章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
攻读学位期间发表的学术论文
参考文献
本文编号：3754894
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