金乌贼qRT-PCR内参基因筛选与TERT基因差异表达分析

发布时间：2023-03-12 13:18

　　金乌贼(Sepia esculenta)是头足类鞘亚纲(Coleoidea)代表种,一年生且终生仅繁殖一次,生殖后快速死亡,属于一次生殖类型。这种在短时间内发生的生殖和死亡现象可以作为研究生殖、衰老和死亡之间错综复杂关系的切入点。衰老的端粒学说(Telomere theory)认为端粒在细胞老化过程中起重要作用,每次细胞分裂都会因DNA聚合酶功能障碍而不能完全复制它们的染色体,端粒DNA序列长度逐渐缩短,最终造成细胞衰老死亡。端粒酶(Telomerase)能延长端粒重复序列,维持染色体稳定,确保细胞复制能力(Wright et al,1995)。TERT(telomerase reverse transcriptase)基因是端粒酶起作用的关键结构和主要调控亚单位,通过逆转录端粒酶RNA模板序列,合成端粒DNA重复序列并添加到染色体末端,从而维持并延长端粒长度。为了探究金乌贼生殖前后至自然死亡过程中TERT基因表达变化规律,本研究从课题组前期获得的金乌贼卵巢转录组数据中筛选出TERT基因,并选取了金乌贼的生长期(Growth Stage,GS)、生殖期产卵期(Spawning Stag...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 衰老的端粒学说
    1.2 端粒与端粒酶研究进展
        1.2.1 端粒与端粒酶的发现
        1.2.2 端粒结构与功能
        1.2.3 端粒酶结构与功能
        1.2.4 端粒及端粒酶与衰老关系
    1.3 端粒检测方法
        1.3.1 DNA印迹法
        1.3.2 实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)
        1.3.3 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)
    1.4 端粒酶检测方法
        1.4.1 端粒酶活性检测
        1.4.2 端粒酶相关基因表达水平检测
    1.5 qRT-PCR内参基因研究进展
        1.5.1 qRT-PCR内参基因作用
        1.5.2 影响内参选择的因素
        1.5.3 软体动物qRT-PCR研究进展
    1.6 金乌贼概述
        1.6.1 金乌贼结构与形态特征
        1.6.2 金乌贼习性
        1.6.3 金乌贼相关研究进展
    1.7 主要研究内容和技术路线
        1.7.1 主要研究内容
        1.7.2 技术路线图
    1.8 本研究目的与意义
第二章 金乌贼qRT-PCR内参基因筛选
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 RNA提取和反转录
        2.2.3 候选内参基因的引物设计
        2.2.4 实时荧光定量PCR
        2.2.5 统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 候选内参基因qRT-PCR扩增
        2.3.2 内参基因在产卵期雌雄金乌贼性腺和肝脏的表达水平差异
        2.3.3 BestKeeper分析候选内参基因的表达稳定性差异
        2.3.4 geNorm分析候选内参基因的表达稳定性
        2.3.5 Normfinder分析候选内参基因的表达稳定性
        2.3.6 geNorm、Normfinder和 Bestkeeper软件分析结果汇总
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 金乌贼TERT基因鉴定和组织差异表达分析
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验方法
    3.3 结果分析
        3.3.1 TERT基因的筛选与鉴定
        3.3.2 不同组织TERT基因表达规律
        3.3.3 金乌贼TERT基因表达性别差异
    3.4 讨论
    3.5 小结
结论
存在的问题
下一步研究计划
硕士期间参与课题
研究成果
参考文献
致谢



本文编号：3761292