番茄SlSWEETs基因的启动子活性分析及亚细胞定位

发布时间：2023-03-22 17:57

　　糖为植物提供重要的碳源和能源。植物生长发育过程中糖转运蛋白对调节糖类运转与分布起着至关重要的作用。SWEETs基因家族作为近年来发现的糖转运蛋白可以参与对多种单糖和多糖的转运,但目前对SWEETs家族成员的生理功能及其作用机制仍有许多问题需要解决。如SWEETs家族成员的亚细胞定位及其时空表达特性等。前期研究表明Sl SWEET7a,-11b,-12c和-14基因在番茄果实成熟的绿熟期与红熟期有不同的表达模式,推测SWEETs基因可能参与番茄果实成熟过程中糖的转运与分配。驱动基因表达的启动子是调控基因表达的重要元件,在基因表达的功能调控中显得尤其重要。本研究对Sl SWEET7a,-11b,-12c和-14的4个基因及启动子进行组织分布与亚细胞定位分析,通过聚合酶链式反应克隆基因全长以及启动子,构建SlSWEETn::GUS与SlSWEETn::GFP载体,通过番茄果实的瞬时表达与拟南芥的遗传转化进行GUS活性的分析来说明启动子的表达模式,通过洋葱与烟草叶片的瞬时表达,进行4个SWEETs基因的亚细胞定位。获得的主要研究结果如下:1、利用Gateway技术构建了4个SWEETs基因的S...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 SWEETs基因家族研究进展
        1.1.1 SWEETs蛋白的发现
        1.1.2 植物SWEET蛋白的结构特征
        1.1.3 植物SWEET蛋白的功能
    1.2 高等植物启动子功能的研究进展
        1.2.1 植物启动子的结构特征
        1.2.2 高等植物启动子类型
        1.2.3 高等植物启动子研究方法
    1.3 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 植物材料与培养
        2.1.2 菌株及载体
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器设备
        2.1.5 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 引物设计
        2.2.2 基因组DNA的提取
        2.2.3 PCR扩增目的片段
        2.2.4 DNA片段的回收
        2.2.5 启动子的GUS表达载体构建
        2.2.6 GFP载体构建
        2.2.7 GUS组织化学染色分析
        2.2.8 洋葱表皮细胞的瞬时表达
        2.2.9 烟草叶片的瞬时表达
3 结果与分析
    3.1 番茄果实4个SWEETs基因启动子的序列分析
    3.2 启动子GUS表达载体的构建
        3.2.1 番茄DNA提取与检测
        3.2.2 启动子片段的克隆
        3.2.3 启动子GUS表达载体的构建
    3.3 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14基因的GFP融合表达载体的构建
        3.3.1 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14基因cDNA全长的获得
        3.3.2 GFP载体构建
    3.4 番茄果实的瞬时表达
    3.5 启动子GUS表达载体在拟南芥中的遗传转化与转基因材料的鉴定
        3.5.1 拟南芥抗性植株的筛选
        3.5.2 转基因拟南芥GUS组织化学染色分析
    3.6 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14在洋葱表皮细胞的亚细胞定位分析
    3.7 SlSWEET7a,-11b,-12c,-14在烟草叶片的亚细胞定位分析
4 讨论
    4.1 番茄4个SWEETs基因的组织分布与亚细胞定位特征
    4.2 SlSWEET7a和SlSWEET14启动子截短对基因表达组织分布的影响
5 结论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3767324