赤芝FPS基因酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选

发布时间：2023-03-24 01:10

　　目的筛选赤芝三萜合成途径中法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的上游调控转录因子。方法首先克隆了FPS基因启动子,并连接至pAbAi质粒构建诱饵载体pAbAi-FPS。将pAbAi-FPS转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌。采用SMART技术构建赤芝酵母单杂交cDNA文库,再将纯化的双链cDNA、pGADT7-Rec共转化诱饵菌株,筛选FPS上游的转录调控因子。结果构建了含pAbAi-FPS的诱饵载体并筛选出诱饵菌株,构建了cDNA文库并转化诱饵菌株,筛选出阳性克隆37个,得到作用FPS基因上游的转录调控因子18个,包括转录因子3个、核糖体蛋白5个及其他家族蛋白10个。结论筛选出转录因子GlSNF2、GlMHR和GlZn2Cys6为调控FPS表达的候选基因,为深入研究FPS基因的表达调控机制奠定了研究基础。

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料
2 方法
    2.1 赤芝FPS基因启动子的克隆及序列分析
    2.2 诱饵菌株p Ab Ai-FPS的构建
    2.3 c DNA融合表达文库的构建及筛选
    2.4 阳性克隆的鉴定及测序分析
3 结果与分析
    3.1 FPS基因启动子的序列分析
    3.2 诱饵载体的鉴定
    3.3 诱饵菌株的筛选
    3.4 c DNA文库的构建及转化诱饵菌株
    3.5 c DNA融合表达文库鉴定及序列分析
4 讨论



本文编号：3769131