丝瓜PPO基因家族的鉴定及其在褐变中作用的初步研究
发布时间：2023-03-25 06:20
丝瓜(Luffa cylindrical)以其柔嫩多汁的果实和清热解暑的功效深受人们的喜爱,但在烹饪时易发生褐变,大大降低了感官品质、食用价值、商品价值,而且还阻碍产品流通,缩短货架期,甚至严重影响人们的视觉感受和食欲,让消费者无法接受,已成为制约果蔬贮运加工业发展的主要障碍之一。多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是引起丝瓜褐变的关键酶,能够在02的参与下对酚类底物催化氧化成醌,进而导致褐变,从分子生物学角度了解褐变机理并控制褐变的发生已成为果蔬采后研究的热点。本研究在转录组测序基础上,以普通丝瓜为材料,通过RT-PCR方法获得丝瓜PPO基因家族成员,利用qPCR(实时荧光定量扩增检测)方法测定丝瓜组织器官、品种、贮藏期、以及鲜切放置时间下PP0基因的表达变化,分析PPO基因表达、酶活性与褐变之间的关系,初步探讨PPO基因功能及其在丝瓜褐变过程中的作用,同时构建重组载体进行原核表达,为丝瓜PPO蛋白的进一步分离纯化和活性测定提供物质基础和理论支持,也为进一步探讨其功能提供可能。主要结果如下:(1)利用改良消光值法测定了 2个有棱丝瓜和6个普通丝瓜品种的褐变度,筛...
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 酶促褐变与多酚氧化酶
2 多酚氧化酶的酶学特性
3 多酚氧化酶的蛋白结构研究
4 PPO基因的分子生物学研究
4.1 PPO基因的克隆
4.2 PPO基因特性
4.2.1 PPO基因具有多基因家族性和高度保守性
4.2.2 PPO基因内含子研究
4.3 PPO基因表达研究
4.4 PPO基因的原核表达
5 多酚氧化酶的功能研究
6 研究目的、意义与主要内容
6.1 研究目的与意义
6.2 研究技术路线
第二章 丝瓜褐变过程中PPO酶活性的变化分析
1 材料与方法
1.1材料与试剂
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 丝瓜褐变度结果分析
2.2 4℃冷藏处理和25℃常温贮存下丝瓜总酚含量的变化
2.3 4℃冷藏过程中丝瓜PPO酶活性变化
2.4 25℃常温处理下丝瓜PPO酶活性变化
3 结论与讨论
第三章 丝瓜PPO家族基因的克隆
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 丝瓜样品总RNA提取质量
2.2 丝瓜PPO基因家族的克隆
2.3 丝瓜PPO cDNA序列比较
3 结论与讨论
第四章 丝瓜PPO基因家族的生物信息学分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 LcPPO基因家族蛋白一级结构分析
2.2 LcPPO基因家族的二、三级结构预测与分析
2.3 LcPPO基因家族保守区域序列分析
2.4 LcPPO基因家族的亚细胞定位与转移肽的预测分析
2.5 LcPPO基因家族的跨膜结构与信号肽的预测分析
2.6 LcPPO基因蛋白磷酸位点预测的预测分析
2.7 LcPPO基因家族同源性分析及进化树图谱的构建
3 结论与讨论
第五章 丝瓜褐变中PPO家族基因的表达及相关性分析
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 试验材料
1.1.2 试验仪器
1.1.3 试验试剂
1.2 试验方法
1.2.1 丝瓜样品的处理
1.2.2 总RNA的提取与cDNA模板的合成
1.2.3 实时荧光定量PCR引物设计
1.2.4 实时荧光定量PGR
1.2.5 数据处理与分析
2 结果与分析
2.1 丝瓜不同组织中LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表达分析
2.2 丝瓜不同品种LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表达分析
2.3 4℃冷藏过程下丝瓜果肉LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表达分析
2.4 25℃常温处理下丝瓜LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表达分析
2.5 LcPPO荧光定量表达量、酶活性以及总酚含量变化的相关性分析
3 结论与讨论
第六章 丝瓜LcPPO2的原核表达
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 克隆载体的构建
2.2 表达载体的构建与鉴定
2.3 重组质粒的鉴定
2.4 融合蛋白诱导表达
3 结论与讨论
全文总结与展望
1.全文总结
2.展望
参考文献
附录
攻读硕士期间发表论文、参加学术会议与获奖情况
致谢
本文编号：3770720
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 酶促褐变与多酚氧化酶
2 多酚氧化酶的酶学特性
3 多酚氧化酶的蛋白结构研究
4 PPO基因的分子生物学研究
4.1 PPO基因的克隆
4.2 PPO基因特性
4.2.1 PPO基因具有多基因家族性和高度保守性
4.2.2 PPO基因内含子研究
4.3 PPO基因表达研究
4.4 PPO基因的原核表达
5 多酚氧化酶的功能研究
6 研究目的、意义与主要内容
6.1 研究目的与意义
6.2 研究技术路线
第二章 丝瓜褐变过程中PPO酶活性的变化分析
1 材料与方法
1.1材料与试剂
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 丝瓜褐变度结果分析
2.2 4℃冷藏处理和25℃常温贮存下丝瓜总酚含量的变化
2.3 4℃冷藏过程中丝瓜PPO酶活性变化
2.4 25℃常温处理下丝瓜PPO酶活性变化
3 结论与讨论
第三章 丝瓜PPO家族基因的克隆
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 丝瓜样品总RNA提取质量
2.2 丝瓜PPO基因家族的克隆
2.3 丝瓜PPO cDNA序列比较
3 结论与讨论
第四章 丝瓜PPO基因家族的生物信息学分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 LcPPO基因家族蛋白一级结构分析
2.2 LcPPO基因家族的二、三级结构预测与分析
2.3 LcPPO基因家族保守区域序列分析
2.4 LcPPO基因家族的亚细胞定位与转移肽的预测分析
2.5 LcPPO基因家族的跨膜结构与信号肽的预测分析
2.6 LcPPO基因蛋白磷酸位点预测的预测分析
2.7 LcPPO基因家族同源性分析及进化树图谱的构建
3 结论与讨论
第五章 丝瓜褐变中PPO家族基因的表达及相关性分析
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 试验材料
1.1.2 试验仪器
1.1.3 试验试剂
1.2 试验方法
1.2.1 丝瓜样品的处理
1.2.2 总RNA的提取与cDNA模板的合成
1.2.3 实时荧光定量PCR引物设计
1.2.4 实时荧光定量PGR
1.2.5 数据处理与分析
2 结果与分析
2.1 丝瓜不同组织中LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表达分析
2.2 丝瓜不同品种LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表达分析
2.3 4℃冷藏过程下丝瓜果肉LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表达分析
2.4 25℃常温处理下丝瓜LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表达分析
2.5 LcPPO荧光定量表达量、酶活性以及总酚含量变化的相关性分析
3 结论与讨论
第六章 丝瓜LcPPO2的原核表达
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 克隆载体的构建
2.2 表达载体的构建与鉴定
2.3 重组质粒的鉴定
2.4 融合蛋白诱导表达
3 结论与讨论
全文总结与展望
1.全文总结
2.展望
参考文献
附录
攻读硕士期间发表论文、参加学术会议与获奖情况
致谢
本文编号：3770720
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3770720.html
最近更新
教材专著
