钩端螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白作用与机制及其致病意义
发布时间：2023-03-29 20:47
背景:致病性钩端螺旋体(Lerptospira,简称钩体)感染引起的钩端螺旋体病(leptospirasis)是全球流行的人兽共患性疾病,也是我国重点防疫和监控的主要传染病之一。致病性钩体通过黏膜或破损皮肤侵入人体后,迅速进入血流引起中毒性败血症,临床主要表现为高热、肌痛、全身浅表淋巴结肿大,随后穿越小血管播散至肺、肝和肾等脏器加重病情。黏附细胞与侵入宿主是病原微生物致病的前提,但致病性钩体黏附因子及其作用机制迄今了解甚少。血管假性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)是关键凝血因子,其A区(v WF-A)可分别与血小板表面糖蛋白Ib(GPIb)受体和胶原蛋白(collagen,COL)结合,使血小板聚集于血管内皮破损后暴露COL的基底膜,发挥抑制出血作用。我们发现,致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株LA＿0012、LA＿0697和LA＿4207基因产物中含有v WF-A超家族结构域,但无与血小板GPIb受体结合位点,但此类基因产物的致病作用与机制迄今未见研究报道。我们推测,上述v WF-A基因产物介导问号钩体黏附细胞胞外基质(extracellular ma...
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
英文缩写词表
第一章 引言
1.1 钩端螺旋体
1.2 钩端螺旋体病
1.3 黏附
1.4 人血管假性血友病因子
1.5 研究内容和目的
1.5.1 研究内容
1.5.2 研究目的
1.6 研究路线
第二章 问号钩端螺旋体目的基因原核表达系统构建、相应抗体制备以及效价测定
2.1 实验材料
2.1.1 实验仪器及耗材
2.1.2 实验试剂
2.1.3 试剂配制
2.1.4 实验菌株
2.1.5 实验质粒
2.2 实验方法
2.2.1 问号钩体LA0012、LA0697和LA4207 基因产物生物信息学分析
2.2.2 问号钩端螺旋体的培养
2.2.3 问号钩端螺旋体基因组DNA的提取
2.2.4 问号钩端螺旋体LA0012、LA0697和LA4207 基因产物的扩增
2.2.5 E.coli DH5α和 E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备
2.2.6 LA0012、LA0697和LA4207 基因的T-A克隆
2.2.7 LA0012、LA0697和LA4207 基因的原核表达系统的构建
2.2.8 rLep0012、rLep0697和rLep4207 诱导表达
2.2.9 SDS-PAGE电泳
2.2.10 14kDa蛋白透析袋的预处理
2.2.11 目的重组蛋白的纯化与收集
2.2.12 rLep0697的复性
2.2.13 目的重组蛋白IgG的制备
2.2.14 免疫双向扩散法检测目的重组蛋白IgG的效价
2.3 实验结果
2.3.1 问号钩体LA0012、LA0697和LA4207 基因产物生物信息学分析
2.3.2 目的基因片段扩增和测序结果
2.3.3 目的重组蛋白表达纯化及相应IgG的制备
第三章 ELISA检测目的重组蛋白与人胶原蛋白结合情况
3.1 实验材料
3.1.1 实验仪器及耗材
3.1.2 实验试剂
3.1.3 试剂配制
3.2 实验方法
3.2.1 r Lep0012、r Lep0697和r Lep4207 蛋白浓度的测定
3.2.2 ELISA检测r Lep0012、r Lep0697和r Lep4207与COLs结合
3.3 实验结果
第四章 表面等离子共振技术检测目的重组蛋白与人胶原蛋白结合情况
4.1 实验材料
4.1.1 实验仪器及耗材
4.1.2 实验试剂
4.1.3 试剂配制
4.2 实验方法
4.2.1 氨基偶联法
4.2.2 进样
4.3 实验结果
第五章 问号钩端螺旋体感染细胞后目的基因表达及外分泌情况
5.1 实验材料
5.1.1 实验菌株
5.1.2 实验细胞
5.1.3 实验仪器及耗材
5.1.4 实验试剂
5.1.5 试剂配制
5.2 实验方法
5.2.1 细胞培养
5.2.2 问号钩端螺旋体培养
5.2.3 问号钩端螺旋体计数
5.2.4 RT-PCR引物设计
5.2.5 问号钩端螺旋体感染细胞模型的建立
5.2.6 LA0012、LA0697和LA4207 基因m RNA表达水平检测
5.2.7 Lep0012、Lep0697和Lep4207蛋白表达检测
5.3 实验结果
5.3.1 钩体感染细胞后目的基因mRNA水平增高
5.3.2 钩体感染细胞后目的蛋白表达水平增高
第六章 讨论
参考文献
综述 血管假性血友病因子(vWF)参与止血过程的研究进展
参考文献
附录
作者简历与攻读学位期间所取得的科研成果
本文编号：3774447
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
英文缩写词表
第一章 引言
1.1 钩端螺旋体
1.2 钩端螺旋体病
1.3 黏附
1.4 人血管假性血友病因子
1.5 研究内容和目的
1.5.1 研究内容
1.5.2 研究目的
1.6 研究路线
第二章 问号钩端螺旋体目的基因原核表达系统构建、相应抗体制备以及效价测定
2.1 实验材料
2.1.1 实验仪器及耗材
2.1.2 实验试剂
2.1.3 试剂配制
2.1.4 实验菌株
2.1.5 实验质粒
2.2 实验方法
2.2.1 问号钩体LA0012、LA0697和LA4207 基因产物生物信息学分析
2.2.2 问号钩端螺旋体的培养
2.2.3 问号钩端螺旋体基因组DNA的提取
2.2.4 问号钩端螺旋体LA0012、LA0697和LA4207 基因产物的扩增
2.2.5 E.coli DH5α和 E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备
2.2.6 LA0012、LA0697和LA4207 基因的T-A克隆
2.2.7 LA0012、LA0697和LA4207 基因的原核表达系统的构建
2.2.8 rLep0012、rLep0697和rLep4207 诱导表达
2.2.9 SDS-PAGE电泳
2.2.10 14kDa蛋白透析袋的预处理
2.2.11 目的重组蛋白的纯化与收集
2.2.12 rLep0697的复性
2.2.13 目的重组蛋白IgG的制备
2.2.14 免疫双向扩散法检测目的重组蛋白IgG的效价
2.3 实验结果
2.3.1 问号钩体LA0012、LA0697和LA4207 基因产物生物信息学分析
2.3.2 目的基因片段扩增和测序结果
2.3.3 目的重组蛋白表达纯化及相应IgG的制备
第三章 ELISA检测目的重组蛋白与人胶原蛋白结合情况
3.1 实验材料
3.1.1 实验仪器及耗材
3.1.2 实验试剂
3.1.3 试剂配制
3.2 实验方法
3.2.1 r Lep0012、r Lep0697和r Lep4207 蛋白浓度的测定
3.2.2 ELISA检测r Lep0012、r Lep0697和r Lep4207与COLs结合
3.3 实验结果
第四章 表面等离子共振技术检测目的重组蛋白与人胶原蛋白结合情况
4.1 实验材料
4.1.1 实验仪器及耗材
4.1.2 实验试剂
4.1.3 试剂配制
4.2 实验方法
4.2.1 氨基偶联法
4.2.2 进样
4.3 实验结果
第五章 问号钩端螺旋体感染细胞后目的基因表达及外分泌情况
5.1 实验材料
5.1.1 实验菌株
5.1.2 实验细胞
5.1.3 实验仪器及耗材
5.1.4 实验试剂
5.1.5 试剂配制
5.2 实验方法
5.2.1 细胞培养
5.2.2 问号钩端螺旋体培养
5.2.3 问号钩端螺旋体计数
5.2.4 RT-PCR引物设计
5.2.5 问号钩端螺旋体感染细胞模型的建立
5.2.6 LA0012、LA0697和LA4207 基因m RNA表达水平检测
5.2.7 Lep0012、Lep0697和Lep4207蛋白表达检测
5.3 实验结果
5.3.1 钩体感染细胞后目的基因mRNA水平增高
5.3.2 钩体感染细胞后目的蛋白表达水平增高
第六章 讨论
参考文献
综述 血管假性血友病因子(vWF)参与止血过程的研究进展
参考文献
附录
作者简历与攻读学位期间所取得的科研成果
本文编号：3774447
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3774447.html
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