暴马桑黄SbLSD基因克隆及差异表达分析

发布时间：2023-04-02 10:07

　　【目的】暴马桑黄是一种重要的药用资源,三萜是其发挥药用功效的主要成分,但是目前获取大量三萜仍然非常困难。通过对暴马桑黄三萜合成途径中的羊毛甾醇14α-脱甲基酶(lanosterol 14-alpha-demethylase,LSD)基因进行克隆及差异表达分析,以期深入了解暴马桑黄三萜合成的调控机理,进而提高三萜产量。【方法】采用PCR扩增得到LSD基因cDNA序列全长,利用生物信息学软件对该基因编码的氨基酸序列进行分析;采取同源重组方法构建原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,SDS-PAGE检测;qRT-PCR技术分析LSD基因在暴马桑黄不同发育阶段转录水平差异。【结果】暴马桑黄LSD基因cDNA全长1 662 bp,编码553个氨基酸,相对分子量为62.26 kDa,命名为SbLSD(登录号为MN864180);跨膜区和亚细胞定位预测显示SbLSD蛋白是在内质网和高尔基体发挥作用的跨膜蛋白;系统进化树结果表明暴马桑黄和灵芝的LSD蛋白同源性最高,符合物种经典分类;SDS-PAGE结果证实在62.26 kDa附近出现目的蛋白条带,说明所获得的基因可以成功表达出蛋白;...

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 试验引物
        1.2.2 Sb LSD基因克隆
        1.2.3 Sb LSD基因序列分析
        1.2.4 Sb LSD基因原核表达载体构建
        1.2.5 Sb LSD基因诱导表达及检测
        1.2.6 Sb LSD基因荧光定量检测
2 结果与分析
    2.1 Sb LSD基因克隆
    2.2 Sb LSD基因生物信息学分析
        2.2.1 Sb LSD蛋白理化性质预测
        2.2.2 Sb LSD蛋白跨膜区预测
        2.2.3 Sb LSD蛋白信号肽预测
        2.2.4 Sb LSD蛋白磷酸化位点预测
        2.2.5 Sb LSD蛋白亚细胞定位预测
        2.2.6 Sb LSD蛋白高级结构预测
        2.2.7 Sb LSD蛋白同源性分析
    2.3 重组质粒的获得
    2.4 Sb LSD基因原核表达
    2.5 Sb LSD基因在不同发育阶段转录水平变化
3 结论与讨论
    3.1 讨论
    3.2 结论



本文编号：3779033