难治性肾病综合征致病基因突变筛查及功能研究

发布时间：2023-04-02 11:38

　　研究目的:难治性肾病综合征(RNS)的表现为激素抵抗、激素依赖或反复复发,其预后差,易发展为终末期肾病(ESRD)。RNS发病机制还不完全清楚,目前认为多种因素均可导致其发生,其中遗传因素在难治性肾病综合征(RNS)的发生发展中起着重要作用。我们前期在局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)家系中发现一个FSGS新的候选致病基因—ARHGAP32基因(c.1213C>G,p.Leu405Val)杂合突变,可能是该家系FSGS的发病原因。本项目是在此基础上,通过体内外研究,初步探讨ARHGAP32表达变化及突变导致足细胞损伤的机制,为RNS发病机制研究及新的治疗措施提供新思路。同时继续对RNS患者进行致病基因筛查和验证,期望检测出与RNS相关的变异,以利于临床诊断、治疗和预后。研究方法:(1)通过体内外实验对ARHGAP32基因突变进行功能研究,研究其蛋白表达水平;构建Arhgap32基因点突变小鼠后,尾静脉注射阿霉素建立Arhgap32基因L405V点突变小鼠的肾脏损伤模型,收集其尿液、血液及肾组织标本,检测相关生化指标和病理分析;检测足细胞的标志物Nephrin和Synaptopod...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第一章 绪论
    1.1 难治性肾病综合征容易发展至终末期肾病
    1.2 遗传变异在难治性肾病综合征发病中起重要作用
    1.3 遗传变异也在中国难治性肾病综合征发病中起重要作用
    1.4 ARHGAP32 可能是难治性肾病综合征的候选致病基因
    1.5 ARHGAP32 基因突变可能影响足细胞的细胞骨架
    1.6 本文主要工作
    1.7 本论文的结构安排
第二章 ARHGAP32 基因突变在体内外的功能研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
            2.1.1.1 实验动物
            2.1.1.2 主要实验试剂
            2.1.1.3 主要实验仪器耗材
        2.1.2 实验方法
            2.1.2.1 Arhgap32基因点突变小鼠模型建立及鼠尾基因型鉴定
            2.1.2.2 动物阿霉素损伤模型建立及分组
            2.1.2.3 尿液和血液相关指标检测
            2.1.2.4 肾组织RNA提取
            2.1.2.5 RNA逆转录
            2.1.2.6 qPCR
            2.1.2.7 石蜡切片
            2.1.2.8 常规病理染色
            2.1.2.9 免疫组织化学染色
            2.1.2.10 统计学方法
    2.2 结果
        2.2.1 Arhgap32基因点突变小鼠模型建立
        2.2.2 建立Arhgap32 基因点突变小鼠阿霉素肾损伤模型
        2.2.3 Arhgap32 蛋白在小鼠肾组织中的表达
        2.2.4 ARHGAP32 基因突变通过影响足细胞引起肾脏损伤
        2.2.5 ARHGAP32 基因突变引起足细胞损伤机制
    2.3 讨论
    2.4 本章小结
第三章 难治性肾病综合征患者的突变筛查
    3.1 材料与方法
        3.1.1 研究对象
        3.1.2 实验方法
            3.1.2.1 对上述患者外周血DNA进行全外显子测序
            3.1.2.2 生物信息学分析筛查可能存在的致病基因突变
    3.2 结果
        3.2.1 临床特征和实验室检查
        3.2.2 基因分析
    3.3 讨论
    3.4 本章小结
第四章 全文总结
    4.1 全文总结
    4.2 后续工作展望
致谢
参考文献



本文编号：3779155