刺激响应型阳离子基因载体的合成及转染研究

发布时间：2023-04-02 21:20

　　基因治疗指的是一种利用DNA重组技术将功能化核酸分子(DNA或RNA)导入靶细胞,纠正或补偿疾病基因,使细胞完全(或部分)恢复正常的生理代谢状态从而达到治疗疾病目的的生物医学新技术。基因治疗的优势在于其能从根本上(基因水平)治疗疾病,目前基因治疗面临的存在的主要技术难题在于缺乏安全高效的基因传递载体。常用的基因载体主要包含病毒载体和非病毒载体两类。虽然病毒载体有着较高的转染效率,但是它存在安全风险、免疫原性、基因传递尺寸大小限制及价格昂贵等弊端。阳离子聚合物和阳离子脂质体作为常用的非病毒基因载体,由于其具有结构多样、易于修饰功能化、良好生物相容性,较低毒性且可降解性等优点,具有成为优秀基因载体的潜力,近年受到越来越多研究者们的关注。本文第一章简介了基因治疗和基因载体,综述了刺激响应型的阳离子基因载体、基因转染过程和基因转染所面临的问题以及解决方法。第二章,我们通过开环聚合将含有刺激响应型硫代缩醛基团的二环氧化物与低分子量的聚乙烯亚胺(PEI)反应,设计、合成了四个活性氧(ROS)响应型的阳离子聚合物。通过系列的生化实验研究,我们发现这些阳离子聚合物具有良好的DNA结合能力,与DNA形成...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 研究背景
    1.1 基因治疗和基因载体简介
    1.2 阳离子聚合物
    1.3 阳离子脂质体
    1.4 刺激响应型阳离子基因载体的研究
        1.4.1 pH刺激响应型阳离子基因载体的研究
        1.4.2 还原响应型阳离子基因载体的研究
        1.4.3 氧化响应型阳离子基因载体的研究
    1.5 阳离子基因载体的基因转染
        1.5.1 阳离子基因转染的过程
        1.5.2 基因转染过程中的主要障碍
    1.6 论文的研究思路和主要内容
第2章 芳香硫代缩醛桥联ROS响应的阳离子聚合物作为新型基因传递载体
    2.1 引言
    2.2 芳香硫代缩醛桥联ROS响应的阳离子聚合物的合成与表征
    2.3 阳离子聚合物的ROS响应
    2.4 阳离子聚合物与质粒DNA的相互作用
        2.4.1 凝胶电泳实验
        2.4.2 粒径电位分析
    2.5 阳离子聚合物的转基因活性研究
        2.5.1 细胞毒性检测分析
        2.5.2 体外基因转染实验
    2.6 本章小结
    2.7 实验部分
        2.7.1 目标阳离子聚合物的合成
        2.7.2 阳离子聚合物的生物实验
第3章 萘二甲酰亚胺的还原响应荧光阳离子脂质
    3.1 引言
    3.2 萘二甲酰亚胺类脂质的合成路线
    3.3 萘二甲酰亚胺类脂质体与质粒DNA的相互作用
        3.3.1 萘二甲酰亚胺类脂质体与质粒DNA的凝胶电泳实验
        3.3.2 萘二甲酰亚胺类脂质体与质粒DNA作用的粒径电位
        3.3.3 萘二甲酰亚胺类脂质体的溴乙啶置换实验
    3.4 萘二甲酰亚胺类脂质体的基因转染活性研究
        3.4.1 脂质体与DNA复合物的细胞毒性检测分析
        3.4.2 脂质体与DNA复合物的体外基因转染实验
        3.4.3 萘二甲酸亚胺脂质体刺激响应释放的荧光检测
    3.5 小结
    3.6 具有不同疏水链的萘二甲酰亚胺类脂质的合成路线
    3.7 疏水链差异的萘二甲酰亚胺脂质体与质粒DNA的相互作用
        3.7.1 凝胶电泳实验
        3.7.2 粒径和zeta电位的测定
    3.8 实验部分
        3.8.1 目标阳离子脂质的合成
        3.8.2 阳离子脂质的生物实验
总结
参考文献
攻读学位期间发表论文情况
致谢



本文编号：3779978