半滑舌鳎leptin及其受体基因克

发布时间：2023-04-05 04:05

　　本文以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象,利用同源克隆和RACE方法获得了半滑舌鳎两种leptin基因(lepa和lepb)及一种受体基因lepr的全长cDNA序列。采用实时荧光定量PCR技术检测了leptin及其受体基因的组织分布特征、早期生长发育过程和生殖周期的时空表达特性。最后,利用原核表达技术实现了半滑舌鳎lepa和lepb体外重组表达和生物活性检测,获得了具有生物活性的重组蛋白。本研究结果为全面认识半滑舌鳎生长发育与生殖机能的调控机制提供了新的基础资料积累。1.半滑舌鳎leptin及其受体基因的克隆和组织表达分析获得了半滑舌鳎两种leptin基因(lepa和lepb)及一种受体基因lepr的全长cDNA序列。lepa和lepb的cDNA全长为1265 bp和1157 bp,分别编码160个氨基酸和158个氨基酸,其空间结构具有较强的保守性。lepr的cDNA全长为4576 bp,编码1133个氨基酸。系统发育分析表明半滑舌鳎LepA、LepB和LepR与棘鳍总目鱼聚为一支。lepa mRNA在卵巢和脑中高表达。lepb mRNA在各组织中均检测...

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 文献综述
    1 leptin及其受体的基因结构
        1.1 leptin的基因结构
        1.2 leptin受体的基因结构
    2 leptin及其受体的组织表达差异
        2.1 leptin的组织分布
        2.2 leptin受体的组织分布
    3 leptin的生理学功能
        3.1 leptin在摄食调节中的作用
        3.2 leptin在调控糖脂代谢中的作用
        3.3 leptin在生殖调控中的作用
        3.4 leptin的其他作用
    4 leptin的信号转导途径
第二章 半滑舌鳎leptin及其受体的克隆和组织表达分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 总RNA提取
        1.3 cDNA反转录
        1.4 中间片段的克隆
        1.5 5'端和3'端cDNA片段的克隆
        1.6 序列分析
        1.7 荧光定量PCR检测
    2 结果
        2.1 lepa、lepb和 lepr的 cDNA克隆表达和系统发育分析
        2.2 lepa、lepb和 lepr基因的组织分布表达
    3 讨论
第三章 瘦素及其受体对半滑舌鳎早期生长发育的调控作用
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 总RNA提取、反转录与荧光定量PCR检测
        1.3 数据统计分析
    2 结果
        2.1 胚胎发育过程中lepa、lepb、lepr和 GH、IGF-I、IGF-II mRNA的表达模式
        2.2 仔鱼和稚鱼生长过程中lepa、lepb、lepr和 GH、IGF-I、IGF-II mRNA的表达模式
        2.3 相关性分析
    3 讨论
第四章 瘦素及其受体对半滑舌鳎卵巢发育的调控作用
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 总RNA提取、反转录与荧光定量PCR检测
        1.3 血清激素的测定
        1.4 数据统计分析
    2 结果
        2.1 卵巢发育分期
        2.2 脑、垂体和卵巢中lepa、lepb和 leprmRNA在不同发育时期的表达特性
        2.3 血清中激素浓度变化
        2.4 相关性分析
    3 讨论
第五章 半滑舌鳎两种leptin基因的体外重组表达和生物活性分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 总RNA提取与cDNA第一链的合成
        1.3 重组质粒的构建
        1.4 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达与检测
        1.5 重组蛋白western-blotting验证和质谱分析
        1.6 重组蛋白的分离和纯化
        1.7 重组蛋白生物活性检测
        1.8 数据统计分析
    2 结果
        2.1 半滑舌鳎lepa/pQE30和lepb/pQE30 重组质粒的构建
        2.2 重组蛋白的诱导表达
        2.3 重组蛋白的western-blotting验证
        2.4 重组蛋白的分离纯化
        2.5 重组蛋白的生物活性的检测
    3 讨论
结论
研究展望
参考文献
附录
致谢



本文编号：3782693