不同质粒载体对GFP单基因瞬时转染ExpiCHO-S细胞表达量的影响

发布时间：2023-04-07 04:22

　　【目的】ExpiCHO细胞瞬时表达能够快速有效地生产重组蛋白,为筛选有效的重组蛋白节省了大量的时间,细胞系的选择、表达载体的选择、转染试剂的选择等是制约ExpiCHO细胞瞬时表达蛋白的重要因素,本研究旨在筛选出在CHO细胞中瞬时表达量较高的载体。【方法】以GFP基因作为目的基因,用不同的真核表达载体构建GFP重组质粒,瞬时转染ExpiCHO-S细胞。转染后4 d观察不同载体表达GFP的荧光数量和强度;转染后8 d对细胞进行裂解,收获裂解上清,用SDS-PAGE对不同载体的表达量进行鉴定。同时用His Trap FF亲和层析柱对裂解上清中的GFP蛋白进行纯化,通过Western Blot比较不同载体GFP蛋白的表达量。【结果】pCDNA3.1-GFP、pCDNA3.4-GFP载体表达的荧光数量最多,pCIneo-GFP载体表达的荧光强度最强,pCMVHA载体表达的荧光数量最少,荧光强度最弱。SDS-PAGE和Western Blot结果均表明pCDNA3.1-GFP、pCDNA3.4-GFP、pCIneo-GFP重组质粒的蛋白表达量高于pCHO-GFP、pCMVHA-GFP重组质粒的蛋白...

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【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 菌种、质粒及细胞
    1.2 主要试剂
    1.3 GFP片段的扩增
    1.4 GFP重组质粒的构建
    1.5 Expi CHO-S细胞表达GFP蛋白
    1.6 GFP蛋白的纯化
2 结果与分析
    2.1 GFP重组质粒的构建
    2.2 GFP蛋白的表达
    2.3 GFP蛋白的SDS-PAGE及Western blot鉴定
3 讨论



本文编号：3785082