无融合生殖候选基因CitRWP在柑橘及其近缘属的分析评价

发布时间：2023-04-08 19:32

　　柑橘是世界第一大水果,拥有庞大的栽培面积和丰富的品种资源。珠心胚是柑橘重要的生殖性状,由珠心组织侵入胚囊发育而来,它阻碍了柑橘的系统性杂交选育,但在砧木利用、品种复壮等方面具有十分积极的意义,对遗传进化和柑橘分类学研究也具有重要影响。若将此无融合生殖性状导入水稻、玉米等作物当中,将极大地简化育种程序,给农业生产带来巨大变革。柑橘珠心胚的遗传调控已有众多研究报道,但都没能落到真实的调控序列上,直到候选基因CitRWP的报道,但相关研究仍缺乏充足的证据,未能完全证实CitRWP对柑橘珠心胚的调控。本研究利用本实验室收集的芽变单胚甜橙、枳及其杂交分离后代以及其它单多胚材料,从基因组分子标记,基因表达检测,cDNA克隆测序三个层面对CitRWP基因进行分析,此外,还利用塔罗科血橙的CitRWP基因表达序列构建了超表达载体,对烟草进行转化,以综合探讨CitRWP的基因功能。1、基因组M/P分子标记验证M/P分子标记是Shimada等根据CitRWP基因启动子区的MITE转座子状况而开发的珠心胚鉴定标记,在其分析的众多柑橘材料中,标记与珠心胚具有很好的一致性,用该标记检测我们的研究材料后,发现该标...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 无融合生殖现象与意义
    1.2 配子体无融合生殖
        1.2.1 MIME突变体的研究背景
        1.2.2 MIME突变体的产生
        1.2.3 MIME在作物无融合生殖中的应用
    1.3 孢子体无融合生殖
        1.3.1 柑橘珠心胚现象
        1.3.2 柑橘珠心胚的遗传学研究
        1.3.3 柑橘珠心胚的转录组学研究
第2章 引言
第3章 材料与方法
    3.1 基因组分子标记检测
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 试验试剂与仪器
        3.1.3 DNA提取与分子标记检测
    3.2 基因表达检测
        3.2.1 试验材料
        3.2.2 试验试剂与仪器
        3.2.3 RNA的提取与c DNA的反转录
        3.2.4 实时荧光定量PCR检测
    3.3 cDNA克隆测序
        3.3.1 试验材料
        3.3.2 试验试剂与仪器
        3.3.3 克隆目的基因
        3.3.4 转化大肠杆菌
    3.4 Cit RWP超表达
        3.4.1 试验材料
        3.4.2 试验试剂与仪器
        3.4.3 构建超表达载体
        3.4.4 超表达载体转化农杆菌
        3.4.5 超表达载体转化烟草
        3.4.6 阳性转基因烟草筛选
第4章 结果与分析
    4.1 基因组分子标记检测
    4.2 Cit RWP基因表达检测
    4.3 Cit RWP的 c DNA克隆测序
    4.4 Cit RWP超表达
        4.4.1 Cit RWP的超表达载体构建
        4.4.2 转基因烟草的PCR鉴定
        4.4.3 转基因Cit RWP对烟草植株表型的影响
第5章 讨论
    5.1 RWP基因家族的功能与序列变异
    5.2 性状遗传调控研究需多层面的协同
    5.3 柑橘珠心胚调控研究的难点与展望
参考文献
致谢
发表文章及参研项目



本文编号：3786347