菌胁迫下厚壳贻贝TLR-i基因表达及其对下游信号通路基因表达的影响

发布时间：2023-04-11 21:26

　　伴随着我国沿海城市工业化不断推进,日常生活废物持续污染,近海养殖业遭受了越来越频繁的病菌侵害,多种海洋经济物种生存环境愈发严峻。厚壳贻贝(Mytilus coruscus)是我国东南沿海各省的养殖贝类之一,由于成年个体底栖固着的滤食性生活方式,成为了众多海洋病原菌的理想宿主,而海洋弧菌就是其中一大主要病原菌。先天免疫在厚壳贻贝免疫系统中占据重要地位,而Toll样受体是先天免疫中的一环。因此,本实验以厚壳贻贝Toll样受体为研究对象,通过同源克隆法及RACE技术得到厚壳贻贝Toll样受体i(McTLR-i)的cDNA全长以及溶菌酶cDNA序列McLYZ,采用荧光定量PCR(real-time fluorescence quantification,RT-qPCR)初步探究McTLR-i、参与TLR/NF-kB通路的接头分子和McLYZ的相对表达趋势是否存在联系,主要实验结果如下:(1)McTLR-i cDNA序列全长为2821bp,其中包含2022bp的开放阅读框,编码673个氨基酸,结构域分析显示其与软体动物的mccTLRs较为相似。McTLR-i与地中海贻贝(Mytilus gall...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 Toll样受体结构、分类及相关配体
        1.1.1 Toll样受体结构特点
        1.1.2 Toll样受体的分类
        1.1.3 Toll样受体的常见配体
    1.2 Toll样受体的相关通路
    1.3 海洋无脊椎动物Toll样受体的研究进展
    1.4 本研究目的和意义
第二章 Mc TLR-i的基因克隆与序列分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验器材
        2.1.3 实验试剂及溶液配制
        2.1.4 实验方法
    2.2 实验结果
        2.2.1 厚壳贻贝RNA的提取与检测
        2.2.2 McTLR-i cDNA全长扩增
        2.2.3 Mc TLR-i cDNA全长特征
        2.2.4 McTLR-i氨基酸序列多序比对
        2.2.5 McTLR-i系统进化分析
    2.3 讨论
第三章 Mc TLR-i的基因表达调控分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验生物
        3.1.2 实验器材
        3.1.3 实验试剂及溶液配制
        3.1.4 实验方法
    3.2 实验结果
        3.2.1 Mc TLR-i组织差异性表达分析
        3.2.2 弧菌胁迫下Mc TLR-i基因的时序性表达
        3.2.3 TLR/NF-κB通路蛋白基因时序性表达
    3.3 讨论
第四章 McLYZ的基因克隆与序列分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 实验器材
        4.1.3 实验试剂及溶液配制
        4.1.4 实验方法
    4.2 实验结果
        4.2.1 厚壳贻贝总RNA的提取与检测
        4.2.2 Mc LYZ cDNA序列特征
        4.2.3 McLYZ多序列比对分析
        4.2.4 McLYZ氨基酸序列分子特性预测
        4.2.5 McLYZ系统进化分析
        4.2.6 McLYZ蛋白三级结构预测
    4.3 讨论
第五章 McLYZ的基因表达调控分析
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验生物
        5.1.2 实验器材
        5.1.3 实验试剂及溶液配制
        5.1.4 实验方法
    5.2 实验结果
        5.2.1 McLYZ组织差异性表达分析
        5.2.2 菌胁迫下McLYZ基因的时序性表达
    5.3 讨论
总结与展望
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果



本文编号：3789778