过表达M-CSF与RANKL基因对相关骨改建因子影响的研究

发布时间：2023-04-22 16:30

　　目的:探讨破骨分化过程中重要的两个因子:巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)分别在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中过表达对破骨、成骨相关因子的影响。方法:全骨髓贴壁培养法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分别构建过表达质粒载体上调M-CSF基因和RANKL基因的表达。使用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)确定最佳转染剂量,并将两种质粒分别转染大鼠骨髓间充质干细胞。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹反应(Western-blot)检测破骨分化特异标志物:M-CSF、RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α以及成骨分化特异标志物:ALP、BMP2、Runx2的mRNA表达水平和蛋白表达水平。结果:(1)流式鉴定BMSCs表面标记物CD45、CD29、CD34阳性率分别为3.8%、94%、0.3%;(2)5μL/孔LTX^?为最佳转染剂量;(3)重组过表达质粒M-CSF、RANKL经酶切证实二者均正确插入相应多克隆区域;(4)RT-PCR和Western-blot结果显示,M-CSF组:M-CSF、RANKL、IL-1、TN...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
研究内容与方法
    1.实验耗材与仪器
    2.试剂的配制
    3.内容与方法
        3.1 大鼠骨髓间充质干细胞的培养
        3.2 质粒载体的构建
        3.3 质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞
        3.4 RT-PCR检测破骨及成骨基因m RNA表达
        3.5 Western-blot检测破骨及成骨基因蛋白水平表达
    4.质量控制
    5.统计方法
    6.技术路线图
结果
讨论
小结
致谢
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
导师评阅表



本文编号：3798005