白桦BpTCP1及BpTCP2基因的功能研究

发布时间：2023-06-03 07:16

　　TCP转录因子是一类植物特有的转录因子,广泛参与到调控植物生长发育的过程当中。本研究以白桦为试材,对TCP家族PCF亚类BpTCP1和BpTCP2基因及启动子的组织部位表达特异性及激素与非生物胁迫应答分析,并对过表达转基因白桦株系进行生长发育及抗旱耐盐性研究,通过转录组及酵母单杂交对其下游靶基因进行鉴定。研究结果如下:1.荧光定量PCR结果显示,BpTCP1及BpTCP2基因在白桦叶片、茎节、顶芽、木质部和韧皮部中均呈现不同程度的上调表达;在激素与非生物胁迫应答分析中,BpTCP1及BpTCP2基因的表达量均呈现出相应变化。2.通过Infusion技术构建BpTCP1基因启动子植物表达载体,利用PlantCARE软件预测结果显示BpTCP1基因启动子中含有多个与激素、非生物胁迫、植株生长发育相关的元件。GUS染色结果表明,BpTCP1基因在植株的叶片及顶芽有表达,对GA3、ABA及4种非生物胁迫产生应答。进一步表明BpTCP1基因对植物叶片发育、激素及非生物胁迫应答具有一定的作用。3.通过Gateway技术构建BpTCP1及BpTCP2过表达载体,并采用农杆菌介导法进行了白桦的遗传转化...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 TCP转录因子的结构与分类
    1.2 TCP转录因子的功能
        1.2.1 TCP转录因子在植物生长发育中的功能研究
        1.2.2 TCP转录因子与植物激素信号的相互作用
    1.3 研究的目的与意义
    1.4 技术路线
2 BpTCP1及BpTCP2基因表达特性分析
    2.1 材料
        2.1.1 试验试剂
        2.1.2 植物材料
    2.2 方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 BpTCP1及BpTCP2基因在白桦不同组织部位的表达特性分析
        2.3.2 BpTCP1及BpTCP2基因在白桦叶片发育过程中的表达特性分析
        2.3.3 BpTCP1及BpTCP2基因激素应答分析
        2.3.4 BpTCP1及BpTCP2基因非生物胁迫应答分析
    2.4 本章小结
3 白桦BpTCP1及BpTCP2启动子克隆及表达分析
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 实验试剂
    3.2 方法
        3.2.1 BpTCP1及BpTCP2启动子克隆
        3.2.2 BpTCP1及BpTCP2启动子顺式作用元件预测
        3.2.3 BpTCP1及BpTCP2启动子载体构建
        3.2.4 白桦的遗传转化及分子检测
        3.2.5 转基因株系的GUS染色
        3.2.6 转基因株系的激素与非生物胁迫处理
    3.3 结果与分析
        3.3.1 BpTCP1及BpTCP2启动子克隆
        3.3.2 BpTCP1及BpTCP2启动子顺式作用元件分析
        3.3.3 BpTCP1及BpTCP2启动子载体构建
        3.3.4 白桦的遗传转化及分子检测
        3.3.5 转基因株系的GUS染色
        3.3.6 转基因株系的激素与非生物胁迫应答分析
    3.4 本章小结
4 BpTCP1及BpTCP2基因的遗传转化及表型观测
    4.1 材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 试剂
    4.2 方法
        4.2.1 BpTCP1及BpTCP2基因的克隆及载体构建
        4.2.2 转化农杆菌及白桦遗传转化
        4.2.3 转基因植株的分子检测
        4.2.4 转BpTCP1及BpTCP2过表达白桦株系的表型观测
        4.2.5 转BpTCP1及BpTCP2过表达白桦株系内源激素测定
    4.3 结果与分析
        4.3.1 BpTCP1及BpTCP2基因的克隆及载体构建
        4.3.2 农杆菌检测及白桦遗传转化
        4.3.3 转基因植株的分子检测
        4.3.4 转BpTCP1及BpTCP2基因过表达株系的表型观测
        4.3.5 转BpTCP1及BpTCP2基因过表达白桦株系内源激素测定
    4.4 本章小结
5 转BpTCP1及BpTCP2过表达白桦株系的抗逆性分析
    5.1 材料
    5.2 方法
        5.2.1转BpTCP1及BpTCP2过表达株系的耐盐性分析
        5.2.2 转BpTCP1及BpTCP2过表达株系的抗旱性分析
    5.3 结果与分析
        5.3.1 转BpTCP1及BpTCP2过表达株系的耐盐性分析
        5.3.2 转BpTCP1及BpTCP2过表达株系的抗旱性分析
    5.4 本章小结
6 BpTCP1及BpTCP2过表达白桦株系转录组分析
    6.1 材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 主要试剂
    6.2 方法
        6.2.1 转录组测序
        6.2.2 RT-PCR验证
    6.3 结果与分析
        6.3.1 RNA-Seq测序质量评估及参考基因组的比对
        6.3.2 转BpTCP1及BpTCP2白桦差异表达基因的筛选
        6.3.3 差异基因的功能分类
        6.3.4 差异基因的代谢途径
        6.3.5 差异表达基因分析
        6.3.6 RT-PCR验证
    6.4 本章小结
7 白桦BpTCP1及BpTCP2基因下游靶基因验证
    7.1 材料
    7.2 方法
        7.2.1 诱饵载体构建
        7.2.2 效应载体构建
        7.2.3 3-AT浓度筛选
        7.2.4 酵母单杂交
    7.3 结果与分析
        7.3.1 效应载体及诱饵载体的构建
        7.3.2 效应载体及诱饵载体的自激活活性验证
        7.3.3 酵母单杂交
    7.4 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3828885