热稳定性O型口蹄疫基因工程病毒的构建及其特性分析

发布时间：2023-08-06 17:41

　　口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease Virus,FMDV)引起猪、牛和羊等偶蹄动物感染的一种重大烈性传染病,是《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)》中的三个单列病种之一。目前,灭活疫苗的免疫接种是预防、控制和净化口蹄疫的主要手段。但口蹄疫病毒对热极其敏感(尤其是O型口蹄疫病毒),温度升高容易诱导病毒粒子解离成五聚体亚单位(12S)而导致疫苗的有效抗原(146S)含量降低,从而影响疫苗的免疫保护效力,进而影响口蹄疫的有效防控。因此,面对目前的市场需求,急需发展一种耐热特性优良的口蹄疫鉴别诊断疫苗,有效提升我国口蹄疫疫苗质量,满足国家口蹄疫免疫净化防控的技术需求。为了发展热稳定的口蹄疫鉴别诊断疫苗候选毒株,本论文从以下3部分进行研究:1.以实验室构建的免疫原性优良的O型口蹄疫标记病毒感染性克隆pO/TAA为骨架,在结构蛋白引入单个或多个氨基酸突变,分别构建了10种基因修饰的口蹄疫全长重组质粒。全长质粒经Not I线化后分别转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞,共成功拯救了9株重组病...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 口蹄疫
    1.2 口蹄疫病毒
    1.3 口蹄疫的流行现状
    1.4 口蹄疫疫苗的分类
        1.4.1 传统疫苗
        1.4.2 新型疫苗
    1.5 热稳定性提高的口蹄疫疫苗
    1.6 本研究的目的和意义
第二章 口蹄疫病毒O型耐热突变株的构建和鉴定
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞、病毒和质粒
        2.1.2 主要试剂和仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 突变位点的设计与质粒合成
        2.2.2 半长质粒与pO/TAA全长质粒的酶切与回收
        2.2.3 连接
        2.2.4 小提质粒
        2.2.5 重组质粒的鉴定
        2.2.6 转染
        2.2.7 拯救病毒的鉴定
        2.2.8 电镜观察
    2.3 实验结果
        2.3.1 重组质粒的鉴定
        2.3.2 重组病毒的拯救
        2.3.3 拯救病毒的鉴定
        2.3.4 电镜观察
    2.4 讨论
第三章 重组口蹄疫病毒的生物学特性和稳定性分析
    3.1 材料
        3.1.1 细胞与病毒
        3.1.2 试剂和仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 蚀斑形成试验
        3.2.2 病毒生长曲线
        3.2.3 热失活实验
        3.2.4 酸失活实验
    3.3 实验结果
        3.3.1 蚀斑形成试验
        3.3.2 病毒生长曲线
        3.3.3 热失活实验
        3.3.4 酸失活实验
    3.4 讨论
第四章 耐热重组病毒的免疫原性研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 细胞、病毒和动物
        4.1.2 主要试剂、耗材和仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 疫苗制备与动物免疫
        4.2.2 病毒中和试验
        4.2.3 重组病毒疫苗的保存期试验
    4.3 实验结果
        4.3.1 病毒中和试验结果
        4.3.2 重组病毒疫苗的保存期试验
    4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3839762