BaMMV病毒蛋白的酵母系统构建及WRKY55基因参与BaMMV感染大麦的作用机理
发布时间：2023-08-06 17:08
大麦是世界上种植面积与总产量排名第四的禾谷类作物,在中国已有悠久的栽种历史,主要用于牲畜饲料、食品加工原料以及酿造啤酒等,在我国主要种植于长江流域。大麦黄花叶病是土传病毒病害,主要由大麦黄花叶病毒(Barley yellow mosaic virus,BaYMV)及大麦和性花叶病毒(Barley mild mosaic virus,BaMMV)引起。病毒寄生于土壤中禾谷多黏菌的孢子中,可以潜伏长达十年之久。大麦黄花叶病已经严重影响大麦产量,因为病毒随土壤中的禾谷多黏菌传播具有持久性,传统化学方法对该病进行防治已经失效,选育抗病品种的大麦才是防控大麦黄花叶病的最有效途径。本课题主要分成两部分工作,一是利用特异性引物分别扩增出13个不同结构的BaMMV编码基因,包括RNA1上的P3、7K1、C1、7K2、VPg、NIa、NIb、CP、NIa-VPg、7K2-NIa-VPg、7K2-VPg和RNA2上的P1和P2,构建酵母双杂系统,用于验证与大麦易感因子eIF4E和隐性抗病基因PDIL5-1之间的互作,结果显示病毒蛋白与eIF4E和PDIL5-1之间没有直接的物理互作。二是通过转录组测序(R...
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略符号与中英文对照表
第一章 文献综述
1.1 大麦概况
1.2 大麦黄花叶病概述
1.2.1 大麦黄花叶病病毒
1.2.2 大麦黄花叶病抗病基因
1.3 WRKY家族在植物中的研究
1.3.1 WRKY基因家族概述
1.3.2 WRKY基因家族的基本结构
1.3.3 W-盒
1.3.4 WRKY基因在植物中的功能研究
1.4 双酶切和通路克隆
1.5 亚细胞定位
1.6 酵母双杂交
1.7 本实验的技术路线
1.8 本实验的目的意义
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.2 实验试剂和实验仪器
2.3 基本试剂
2.4 WRKY55的基因预测分析
2.4.1 进化树构建
2.4.2 基因表达分析
2.5 RNA提取及检测
2.6 RNA逆转录成cDNA
2.7 WRKY55感病前后相对表达量分析
2.8 获取BaMMV、eIF4E、PDIL5-1、WRKY55目的基因
2.8.1 获得目的片段
2.8.2 目的片段与克隆载体连接
2.8.3 酵母遗传转化
2.8.4 WRKY55转录因子活性检测
2.8.5 自激活活性检测
2.8.6 酵母双杂交检测蛋白质互作
2.9 亚细胞定位
2.9.1 转化农杆菌
2.9.2 烟草注射
2.9.3 亚细胞定位表达
第三章 结果和分析
3.1 BaMMV、eIF4E、HvPDIL5-1构建
3.1.1 BaMMV截短片段质粒构建
3.1.2 BaMMV截短片段在pGADT7和pGBKT7构成的融合蛋白
3.1.3 BaMMV截短蛋白自激活活性
3.1.4 PDIL5-1和eIF4E自激活活性
3.1.5 PDIL5-1和eIF4E分别同BaMMV截短蛋白的互作
3.2 WRKY55的基因预测分析
3.2.1 WRKY55进化树分析
3.2.2 WRKY55时空表达分析
3.2.3 WRKY55保守结构域分析
3.3 WRKY55在抗感材料中的相对表达量分析
3.4 WRKY55基因克隆
3.4.1 WRKY55基因通路克隆
3.5 WRKY55亚细胞定位
3.6 WRKY55与BaMMV截短蛋白的蛋白互作
3.6.1 WRKY55的转录因子活性检测
3.6.2 WRKY55的自激活活性
3.6.3 WRKY55与BaMMV截短蛋白的酵母双杂
第四章 讨论和结论
4.1 BaMMV、eIF4E和PDIL5-1酵母系统构建
4.2 WRKY55基因分析
4.3 WRKY55基因通路克隆
4.4 亚细胞定位
4.5 BaMMV与WRKY55的蛋白质互作
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3839717
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【学位级别】：硕士
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摘要
ABSTRACT
英文缩略符号与中英文对照表
第一章 文献综述
1.1 大麦概况
1.2 大麦黄花叶病概述
1.2.1 大麦黄花叶病病毒
1.2.2 大麦黄花叶病抗病基因
1.3 WRKY家族在植物中的研究
1.3.1 WRKY基因家族概述
1.3.2 WRKY基因家族的基本结构
1.3.3 W-盒
1.3.4 WRKY基因在植物中的功能研究
1.4 双酶切和通路克隆
1.5 亚细胞定位
1.6 酵母双杂交
1.7 本实验的技术路线
1.8 本实验的目的意义
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.2 实验试剂和实验仪器
2.3 基本试剂
2.4 WRKY55的基因预测分析
2.4.1 进化树构建
2.4.2 基因表达分析
2.5 RNA提取及检测
2.6 RNA逆转录成cDNA
2.7 WRKY55感病前后相对表达量分析
2.8 获取BaMMV、eIF4E、PDIL5-1、WRKY55目的基因
2.8.1 获得目的片段
2.8.2 目的片段与克隆载体连接
2.8.3 酵母遗传转化
2.8.4 WRKY55转录因子活性检测
2.8.5 自激活活性检测
2.8.6 酵母双杂交检测蛋白质互作
2.9 亚细胞定位
2.9.1 转化农杆菌
2.9.2 烟草注射
2.9.3 亚细胞定位表达
第三章 结果和分析
3.1 BaMMV、eIF4E、HvPDIL5-1构建
3.1.1 BaMMV截短片段质粒构建
3.1.2 BaMMV截短片段在pGADT7和pGBKT7构成的融合蛋白
3.1.3 BaMMV截短蛋白自激活活性
3.1.4 PDIL5-1和eIF4E自激活活性
3.1.5 PDIL5-1和eIF4E分别同BaMMV截短蛋白的互作
3.2 WRKY55的基因预测分析
3.2.1 WRKY55进化树分析
3.2.2 WRKY55时空表达分析
3.2.3 WRKY55保守结构域分析
3.3 WRKY55在抗感材料中的相对表达量分析
3.4 WRKY55基因克隆
3.4.1 WRKY55基因通路克隆
3.5 WRKY55亚细胞定位
3.6 WRKY55与BaMMV截短蛋白的蛋白互作
3.6.1 WRKY55的转录因子活性检测
3.6.2 WRKY55的自激活活性
3.6.3 WRKY55与BaMMV截短蛋白的酵母双杂
第四章 讨论和结论
4.1 BaMMV、eIF4E和PDIL5-1酵母系统构建
4.2 WRKY55基因分析
4.3 WRKY55基因通路克隆
4.4 亚细胞定位
4.5 BaMMV与WRKY55的蛋白质互作
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3839717
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3839717.html
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