白桦BpLTP基因表达及耐盐功能分析
发布时间：2023-08-13 19:34
高等植物脂质转运蛋白(LTP,lipid transfer protein)是一种小分子碱性蛋白。有研究表明LTP家族基因不仅参与细胞壁的松动还可以响应环境胁迫应答。因此本研究克隆并筛选耐盐相关的白桦(Betulaplatyphylla Suk)LTP基因,并且初步分析其在抵抗盐胁迫中的功能,获得以下结果:通过白桦全基因组比对分析筛选获得了 6条具有完整ORF的LTP基因序列,命名为BpLTP1-6。生物信息学分析结果显示BpLTP1-6编码区序列长度在350bp-400bp,均具有LTP家族的结构域。BpLTP家族蛋白均为疏水性蛋白,蛋白高级结构预测分析显示该家族蛋白由α螺旋、β折叠、β转角和无规则卷曲相互盘绕、折叠三维构象。BpLTP家族启动子含有 ABRE、G-Box、MBS、TAC-element 等多种元件。利用实时荧光定量PCR和亚细胞定位研究BpLTP基因及蛋白的表达模式。结果显示LTP家族基因在叶中表达量普遍高于茎和根,仅有BpLTP3在茎中表达高于其它组织。6条基因对盐胁迫响应程度和时间不同,但都受到盐胁迫的诱导。BpLTP1、2、5基因受甘露醇胁迫诱导,BpLTP3...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 植物脂质转运蛋白研究进展
1.1.1 脂质转运蛋白质及其分类
1.1.2 LTP基因与盐胁迫相关的研究进展
1.1.3 LTP基因与干旱胁迫相关的研究进展
1.1.4 LTP基因与冷胁迫相关的研究进展
1.1.5 LTP基因参与生物胁迫相关研究进展
1.2 研究目的及意义
2 白桦LTP家族基因克隆及生物信息学分析
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 载体与菌种
2.1.3 主要试剂
2.1.4 培养基配制
2.1.5 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 BpLTP基因鉴定
2.2.2 BpLTP家族基因克隆
2.2.3 目的基因片段的胶回收
2.2.4 连接、转化与测序
2.2.5 LTP家族基因生物信息学分析
2.3 结果分析
2.3.1 白桦LTP家族基因的鉴定及克隆
2.3.2 BpLTP蛋白结构域分析
2.3.3 LTP家族基因亲水性分析
2.3.4 LTP家族基因蛋白结构预测
2.3.5 LTP家族多序列比对分析
2.3.6 LTP家族基因进化树分析
2.3.7 白桦LTP基因启动子序列分析
2.4 本章小结
3 白桦LTP家族基因的表达模式分析
3.1 LTP家族基因组织特异性及胁迫响应表达分析
3.1.1 植物材料
3.1.2 主要试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 实验方法
3.2 LTP家族蛋白亚细胞定位分析
3.2.1 植物材料
3.2.2 主要试剂
3.2.3 载体和菌株
3.2.4 实验仪器
3.2.5 实验方法
3.3 结果分析
3.3.1 白桦LTP家族基因组织特异性表达分析
3.3.2 LTP家族基因响应NaCl胁迫处理的表达模式分析
3.3.3 LTP家族基因响应甘露醇胁迫的表达模式分析
3.3.4 LIP家族基因响应GA3激素处理的表达模式分析
3.3.5 白桦pBI121-GFP-BpLTPs载体构建
3.3.6 BpLTPS蛋白亚细胞定位分析
3.4 本章小结
4 植物表达载体构建及转基因功能分析
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 载体与菌种
4.1.3 主要试剂
4.1.4 药品及培养基制备
4.1.5 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 过表达载体构建及工程菌的制备
4.2.2 BpLTP4转基因烟草获得
4.2.3 BpLTPs瞬时侵染野生型白桦
4.2.4 组织化学染色
4.2.5 生理生化指标测定
4.3 实验结果
4.3.1 白桦pROKⅡ-BpLTPs载体构建
4.3.2 异源转化烟草耐盐功能分析
4.3.3 瞬时转化白桦耐盐功能分析
4.4 本章小结
讨论
结论
参考文献
致谢
本文编号：3841811
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 植物脂质转运蛋白研究进展
1.1.1 脂质转运蛋白质及其分类
1.1.2 LTP基因与盐胁迫相关的研究进展
1.1.3 LTP基因与干旱胁迫相关的研究进展
1.1.4 LTP基因与冷胁迫相关的研究进展
1.1.5 LTP基因参与生物胁迫相关研究进展
1.2 研究目的及意义
2 白桦LTP家族基因克隆及生物信息学分析
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 载体与菌种
2.1.3 主要试剂
2.1.4 培养基配制
2.1.5 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 BpLTP基因鉴定
2.2.2 BpLTP家族基因克隆
2.2.3 目的基因片段的胶回收
2.2.4 连接、转化与测序
2.2.5 LTP家族基因生物信息学分析
2.3 结果分析
2.3.1 白桦LTP家族基因的鉴定及克隆
2.3.2 BpLTP蛋白结构域分析
2.3.3 LTP家族基因亲水性分析
2.3.4 LTP家族基因蛋白结构预测
2.3.5 LTP家族多序列比对分析
2.3.6 LTP家族基因进化树分析
2.3.7 白桦LTP基因启动子序列分析
2.4 本章小结
3 白桦LTP家族基因的表达模式分析
3.1 LTP家族基因组织特异性及胁迫响应表达分析
3.1.1 植物材料
3.1.2 主要试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 实验方法
3.2 LTP家族蛋白亚细胞定位分析
3.2.1 植物材料
3.2.2 主要试剂
3.2.3 载体和菌株
3.2.4 实验仪器
3.2.5 实验方法
3.3 结果分析
3.3.1 白桦LTP家族基因组织特异性表达分析
3.3.2 LTP家族基因响应NaCl胁迫处理的表达模式分析
3.3.3 LTP家族基因响应甘露醇胁迫的表达模式分析
3.3.4 LIP家族基因响应GA3激素处理的表达模式分析
3.3.5 白桦pBI121-GFP-BpLTPs载体构建
3.3.6 BpLTPS蛋白亚细胞定位分析
3.4 本章小结
4 植物表达载体构建及转基因功能分析
4.1 实验材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 载体与菌种
4.1.3 主要试剂
4.1.4 药品及培养基制备
4.1.5 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 过表达载体构建及工程菌的制备
4.2.2 BpLTP4转基因烟草获得
4.2.3 BpLTPs瞬时侵染野生型白桦
4.2.4 组织化学染色
4.2.5 生理生化指标测定
4.3 实验结果
4.3.1 白桦pROKⅡ-BpLTPs载体构建
4.3.2 异源转化烟草耐盐功能分析
4.3.3 瞬时转化白桦耐盐功能分析
4.4 本章小结
讨论
结论
参考文献
致谢
本文编号：3841811
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3841811.html
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