白菜型油菜种质资源抗旱鉴定及相关基因筛选

发布时间：2017-05-21 20:02

  本文关键词：白菜型油菜种质资源抗旱鉴定及相关基因筛选，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为研究采集于青海省境内不同生态环境下的白菜型油菜种质资源的抗旱性差异,鉴定具有强抗旱性的优异白菜型油菜种质,并针对具有强抗旱性的种质资源进行抗旱相关基因的筛选鉴定研究,本试验收集不同生态环境下的白菜型油菜种质共35份,对其进行抗旱性鉴定、抗旱相关片段的分离鉴定及表达分析,主要结果如下:1、萌发期抗旱性鉴定试验根据各试验指标将35份白菜型油菜种质资源进行抗旱性排序后发现,35份不同的白菜型油菜种质资源的抗旱性存在一定差异;水培实验和苗期盆栽实验对抗旱较强的的种质资源进行进一步PEG胁迫验证实验表明,之前萌发期的抗旱鉴定真实有效,排名较前的的油菜品种在萌发期及苗期的抗旱性均强于其他种质资源;2、抗旱相关片段的分离及鉴定研究表明,抗旱相关基因的表达决定着植物的抗旱性强弱。从抗旱性最强的种质资源蜡烛油菜中筛选出干旱胁迫上调表达片段27个,下调片段17个。其中27个上调表达片段中21个被成功克隆,21个片段中,20个片段均与芸薹属植物高度相似。3、表达分析以β-actin作为内参基因,以前期筛选得到的X2-7片段序列设计引物,利用实时荧光半定量RT-PCR对31号蜡烛油菜中在20%浓度PEG胁迫下的子叶、叶、根和正常供水条件下的子叶、叶、根中X2-7基因片段的表达量进行分析。结果表明,在正常生长情况下X2-7基因片段在PEG胁迫下有一定量的表达,干旱胁迫诱导后上调表达,且在干旱胁迫的子叶中表达量较高。以上结果表明,X2-7基因片段受干旱胁迫的诱导而表达,是白菜型油菜资源节水抗旱的相关基因。
【关键词】：白菜型油菜种质 资源抗旱性 基因筛选 cDNA-AFLP
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S565.4
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 文献综述9-19
• 1. 种质资源研究10-14
• 1.1 种质资源概念10
• 1.2 种质资源的研究意义10-11
• 1.3 种质资源的研究方法11-14
• 1.3.1 形态学水平11-12
• 1.3.2 染色体水平12
• 1.3.3 DNA分子水平12-14
• 2 抗旱性14-16
• 2.1 抗旱性概念14
• 2.2 抗旱性研究进展14-16
• 3 基因分离鉴定研究进展16
• 4 表达分析的研究进展16-17
• 5 研究目的和意义17-19
• 第2章 白菜型油菜种质资源萌发期抗旱性初步筛选研究19-26
• 1 材料与方法19-20
• 1.1 材料19-20
• 1.2 方法20
• 1.2.1 实验设计20
• 2 结果与分析20-24
• 2.1 调查指标分析结果20-24
• 2.1.1 发芽率20-21
• 2.1.2 根长21-22
• 2.1.3 芽长22
• 2.1.4 确定最佳调查时间22
• 2.1.5 油菜种质资源的抗旱性初步筛选22-24
• 3.讨论24-26
• 第3章 白菜型油菜种质资源的苗期水培抗旱验证研究26-33
• 1 材料与方法26-27
• 1.1 材料26
• 1.2 方法26-27
• 1.2.1 实验设计26-27
• 2 结果与分析27-32
• 2.1 PEG模拟干旱胁迫下的幼苗存活率及长势27-29
• 2.2 PEG模拟干旱胁迫下的根系形态29-32
• 3 讨论32-33
• 第4章 白菜型油菜种质资源苗期抗旱性验证研究33-36
• 1 材料与方法33
• 1.1 材料33
• 1.2 方法33
• 1.2.1 实验设计33
• 2 结果与分析33-34
• 3 讨论34-36
• 第5章 白菜型油菜种质资源抗旱相关基因的筛选36-46
• 1 材料与方法36-43
• 1.1 材料36-37
• 1.1.1 试验材料36
• 1.1.2 溶液配置36
• 1.1.3 主要仪器设备36-37
• 1.2 方法37-43
• 1.2.1 RNA提取37
• 1.2.2 DNA准备37
• 1.2.3 DNA酶切37-38
• 1.2.4 连接接头38-40
• 1.2.5 预扩40-41
• 1.2.6 选择性扩增41-42
• 1.2.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测42
• 1.2.8 染色42-43
• 1.2.9 拍照及统计43
• 2 结果与分析43-45
• 2.1 基因池的建立43-44
• 2.2 差异片段筛选44-45
• 3 讨论45-46
• 第6章 白菜型油菜种质资源抗旱相关基因的分离鉴定46-52
• 1 材料与方法46-48
• 1.1 材料46
• 1.2 方法46-48
• 1.2.1 差异片段的回收46
• 1.2.2 连接46
• 1.2.3 转化46-47
• 1.2.4 克隆的鉴定与扩大培养47-48
• 1.2.5 测序及BLAST比对48
• 2 结果与分析48-51
• 2.1 差异片段的回收48
• 2.2 目的基因的连接、转化及克隆48-49
• 2.3 测序及BLAST比对49-51
• 3 讨论51-52
• 第7章 白菜型油菜种质资源抗旱相关基因的表达分析52-58
• 1 材料与方法52-54
• 1.1 材料52
• 1.2 方法52-54
• 1.2.1 RNA准备52
• 1.2.2 引物的设计52
• 1.2.3 c DNA的合成52-53
• 1.2.4 普通PCR确定退火温度53-54
• 1.2.5 半定量荧光PCR54
• 1.2.6 定量计算及统计分析54
• 2 结果与分析54-57
• 2.1 总RNA质量检测54-55
• 2.2 普通PCR设定退火温度55
• 2.3 溶解曲线分析55-56
• 2.4 X2-7 基因片段的表达模式分析56-57
• 3 讨论57-58
• 第8章 全文结论58-60
• 参考文献60-66
• 致谢66-67
• 作者简介67

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