腺病毒介导的LAMA3基因转染在牙周再附着形成中的作用

发布时间：2023-09-29 00:10

　　研究背景:健康牙龈结缔组织主要通过非角化的结合上皮牢固地附着在牙齿硬组织上,封闭软硬组织交界处,从而阻止病原体和刺激物渗透到下面的软组织和骨组织。然而,临床探诊、牙周炎、牙周手术、正畸牵引等均会在一定程度上损伤破坏结合上皮,导致牙周附着丧失。结合上皮一侧通过外基板与下方的结缔组织相连接,另一侧通过内基板和半桥粒附着在牙齿上。内基板的主要成分之一是层粘连蛋白332(Laminin 332,LM332),其中LM332的α3链(LAMA3)在调控上皮细胞的迁移、粘附以及半桥粒的形成中具有重要作用。基因治疗是从分子水平研究疾病的新疗法,通过将外源正常基因导入靶细胞从而达到治疗目的,而腺病毒载体是目前基因治疗最为常用的病毒载体之一。研究目的:本研究通过构建过表达LAMA3基因的腺病毒载体,分别进行体内、体外转染实验,探讨其在牙周再附着形成中的作用,为结合上皮在创伤愈合过程中形成稳固的整合提供科学合理的实验依据。研究方法:本研究首先构建LAMA3过表达腺病毒,通过转染人永生化表皮细胞(Ha Ca T)摸索最适MOI值;然后通过细胞粘附、细胞划痕、实时荧光定量PCR、Western Blot、免疫...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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致谢
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引言
第一章 LAMA3过表达腺病毒的细胞生物学评价
    1.1 实验材料与设备
        1.1.1 主要材料
        1.1.2 细胞
        1.1.3 主要试剂
        1.1.4 主要仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 Ha Ca T细胞复苏、传代
        1.2.2 载LAMA3过表达腺病毒的构建
        1.2.3 腺病毒最适感染复数测定
        1.2.4 细胞转染步骤
        1.2.5 细胞活性检测
        1.2.6 细胞早期粘附实验
        1.2.7 细胞划痕实验
        1.2.8 实时荧光定量PCR(RT-PCR)
        1.2.9 Western Blot检测相关蛋白表达
        1.2.10 免疫荧光检测相关蛋白的表达
        1.2.11 透射电子显微镜检测半桥粒结构
        1.2.12 数据统计分析
    1.3 实验结果
        1.3.1 腺病毒感染复数检测
        1.3.2 转染腺病毒后HaCaTs增殖活性情况
        1.3.3 细胞早期粘附及迁移情况
        1.3.4 PCR检测目的基因及相关基因的表达
        1.3.5 WB法检测相关蛋白的表达
        1.3.6 免疫荧光检测相关蛋白的表达
        1.3.7 透射电镜检测HaCaT细胞半桥粒结构
    1.4 讨论
    1.5 小结
第二章 LAMA3过表达腺病毒在牙周再附着形成中的作用研究
    2.1 实验材料和设备
        2.1.1 主要材料
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 动物实验
        2.2.2 样本收集
        2.2.3 免疫形态学分析
        2.2.4 辣根过氧化物酶(HRP)浸润试验
        2.2.5 数据统计分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 组织学观察
        2.3.2 HRP渗透性检测结果
    2.4 讨论
    2.5 小结
全文总结
参考文献
综述 牙周再附着过程中生物学封闭形成的研究进展
    参考文献
个人简历及在读期间所取得的科研成果



本文编号：3848892