龙眼胚性愈伤组织DRM1基因的克隆及其定位与表达分析

发布时间：2023-10-06 14:06

　　该研究以龙眼胚性愈伤组织的转录组数据为基础,对龙眼胚性愈伤组织DlDRM1基因进行克隆和生物学信息分析,并检测其在体胚发生过程中不同发育阶段、不同浓度的外源激素(2,4-D、IAA、KT)处理下及不同组织部位的表达,以揭示DlDRM1基因在龙眼体胚发生过程中的功能。结果表明:(1)从龙眼转录组unigene序列筛选获得龙眼结构域重排甲基化酶1基因(命名为DlDRM1)全长序列,并利用RT-PCR法从‘红核子’龙眼胚性愈伤组织中克隆获得DlDRM1基因的cDNA全长序列(GenBank登录号为KY990493);DlDRM1基因cDNA全长2 574bp,包括494bp的5′UTR,184bp的3′UTR,可编码包含631个氨基酸的蛋白质。(2)生物信息学分析显示,DlDRM1是一个不稳定的亲水蛋白,不含信号肽,不存在跨膜结构域,其分子式为C₃₁₀₄H₄₈₃₉N₈₅₁O₉₈₄S₂₈;序列比对和系统进化分析表明,龙眼DlDRM1与脐橙DRM相似度最高(76.85%),二者亲缘关系也...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 激素处理龙眼胚性愈伤组织
        1.2.2 总RNA提取及逆转录
        1.2.3 转录组数据分析及DlDRM1基因序列的获得
        1.2.4 引物设计
        1.2.5 目的基因的扩增
        1.2.6 生物信息分析
        1.2.7 实时荧光定量PCR
        1.2.8 洋葱亚细胞定位
2 结果与分析
    2.1 龙眼DlDRM1基因cDNA全长序列的获得与验证
    2.2 龙眼DlDRM1生物信息学分析
    2.3 龙眼DlDRM1氨基酸序列比对及进化分析
    2.4 龙眼DlDRM1基因转录水平的qPCR分析
        2.4.1 DlDRM1在‘四季蜜’龙眼不同组织部位中的表达情况
        2.4.2 DlDRM1在龙眼非胚性和胚性培养物中转录水平的qPCR分析
        2.4.3 DlDRM1在不同外源激素 (IAA、KT、2, 4-D) 处理下的表达模式
    2.5 龙眼DlDRM1的亚细胞定位分析
3 讨论
    3.1 DlDRM1是一个定位于细胞膜和细胞核的含泛素结合域的蛋白
    3.2 DlDRM1在龙眼体胚发生过程中发挥着重要调控作用
    3.3 DlDRM1的表达受生长素和细胞分裂素调控



本文编号：3851846