从细胞水平探究CMD A、CMD B及相关基因对细胞表征调节的分子机制

发布时间：2023-11-04 12:43

　　心血管疾病多年来一直位于全球居民疾病致死的首位。其中,脑卒中(Stroke)、冠心病(Coronary heart disease)、肺原性心脏病(Pulmonary heart disease)和心力衰竭(Heart failure,HF)等心血管疾病近几年来患病人数持续增加。而心脏肥大作为一项严重的心脏异常指标,如果不能及时得到控制,将会使得心脏的代偿功能失调,从而引发心力衰竭等一系列致死性心脏疾病。心脏肥大是由于受到外部因素或内源性因素带来的各种刺激的情况下心脏为了维持正常的心输出量,导致蛋白质合成增加和心肌细胞体积增大,而引起的心脏异常。而心肌细胞内外Ca2+浓度的改变与心脏肥大的发生有着密切关联,Ca2+调节机制发生障碍是心脏肥大发生的重要原因。CMDA、CMDB作为参与细胞膜上钙离子通道兰尼碱受体2(Ryanodinereceptor2,RyR2)通道调节的相关蛋白,对于心肌细胞的钙离子调节发挥着重要作用。目前的研究中,已知CMD作为磷蛋白磷酸酶PPT家族中的一种,可使T细胞核因子(Nuclear factor of activated Tcells,NFAT)活化而发生去...

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摘要
Abstract
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第1章 引言
    1.1 CMD的结构和功能
    1.2 CMD关于心脏肥大的研究进展
        1.2.1 CMD与心脏肥大
        1.2.2 CMD抑制剂
    1.3 PPTA的结构和功能
    1.4 PPTA关于心脏肥大的相关研究
    1.5 CAMRs的结构和功能
    1.6 RYR的结构和功能
    1.7 钙调蛋白介导的心脏肥大信号通路
    1.8 本课题的研究目的及意义
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料与设备
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 分子克隆
        2.2.2 细胞培养相关实验
        2.2.3 Western blot
        2.2.4 实时荧光定量PCR
        2.2.5 数据的统计学分析
第3章 实验结果与分析
    3.1 分子克隆
        3.1.1 CMD A和CMD B目的片段克隆
        3.1.2 重组质粒的构建
        3.1.3 重组质粒测序结果
        3.1.4 CMD A全序列目的片段克隆结果
    3.2 PEI法细胞瞬时转染
        3.2.1 CMD A、CMD B重组质粒的细胞瞬时转染
        3.2.2 CMD A基因全序列重组质粒的细胞瞬时转染
    3.3 CMD A基因及其完整序列和CMD B基因对于细胞表征的影响
        3.3.1 过表达CMD基因对于细胞体积的影响
        3.3.2 过表达CMD基因对于细胞面积的影响
    3.4 CMD A及其全序列和CMD B基因过表达对于心脏肥大相关钙调基因在蛋白表达水平的影响
        3.4.1 CMD A及其全序列和CMD B基因对CAMR 1和CAMR 2蛋白表达的影响
        3.4.2 CMD A及其全序列和CMD B基因对PPTA蛋白表达的影响
    3.5 CMD A及其全序列和CMD B基因对于心脏肥大相关钙调蛋白基因在mRNA表达水平的影响
        3.5.1 总RNA的提取及检测
        3.5.2 CMD过表达对CAMR 1和CAMR 2基因mRNA水平表达量的影响
        3.5.3 CMD过表达对PPTAA和PPTA C基因mRNA水平表达量的影响
    3.6 细胞周期同步化
    3.7 细胞周期测定结果
第4章 讨论
    4.1 两种细胞材料的特征及PEI转染效果
    4.2 CMD对于细胞肥大的调节
        4.2.1 CMD对于细胞体积的调节
        4.2.2 CMD对于细胞面积的调节
    4.3 CMD与心脏内钙相关蛋白的相互作用
        4.3.1 CMD对于蛋白表达水平的影响
        4.3.2 CMD对于mRNA表达水平的影响
    4.4 过表达CMD对于细胞周期的影响
    4.5 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间的科研成果



本文编号：3860330