家蝇PGRP-LE基因的克隆表达与功能分析

发布时间：2023-11-26 14:20

　　无脊椎动物先天免疫(Innate immunity)系统是通过机体内的模式识别受体(Pattern Recognition Receptors,PRRs)识别入侵病原微生物表面的病原相关分子模式(Pathogen Associated Molecular Patterns,PAMPs)而激活的。而肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)是一类在动物先天免疫系统中用来识别肽聚糖(PGN)的蛋白家族,在激活免疫途径中起重要作用。本研究中我们以家蝇为研究对象,克隆了家蝇的PGRP-LE基因(MdPGRP-LE),对家蝇PGRP家族进行系统的生物信息学分析,并从分子水平上对MdPGRP-LE在家蝇先天免疫中的功能进行了研究。研究结果如下:1.我们筛选到26条MdPGRP基因,包括8条PGRP-L和18条PGRP-S。大多数PGRP-S都存在信号肽,除MdPGRP-LB有信号肽外,其它PGRP-L基因成员均无信号肽。此外,MdPGRP在家蝇基因组不同Scaffold上呈现不均匀分布。PGRP-L的外显子数目普遍多于PGRP-S。2.对Md...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 肽聚糖识别蛋白(PGRP)的研究进展
    1.2 昆虫的先天免疫系统
        1.2.1 昆虫的免疫识别机制
        1.2.2 果蝇免疫信号转导途径
        1.2.3 PPO(酚氧化酶原)激活途径
    1.3 研究目的及意义
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验昆虫
        2.1.2 菌种和载体
        2.1.3 实验引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 家蝇PGRP家族生物信息学分析
        2.2.2 家蝇不同组织、发育阶段和细菌刺激的表达模式
        2.2.3 家蝇幼虫干扰效果检测及干扰后功能分析
        2.2.4 MdPGRP-LE基因的原核表达及蛋白纯化
        2.2.5 rMdPGRP-LE与细菌结合活性检测
        2.2.6 rMdPGRP-LE与 PAMPs结合活性检测
        2.2.7 rMdPGRP-LE与细菌凝集活性检测
        2.2.8 rMdPGRP-LE与 PGN酰胺酶活性检测
        2.2.9 rMdPGRP-LE抗菌活性检测
第三章 实验结果与分析
    3.1 家蝇PGRP家族生物信息学分析
        3.1.1 MdPGRP基因家族序列分析
        3.1.2 MdPGRP蛋白家族序列分析
    3.2 MdPGRP-LE基因在不同条件下的表达模式分析
        3.2.1 MdPGRP-LE基因在家蝇3 龄幼虫不同组织中的表达水平
        3.2.2 MdPGRP-LE基因在家蝇不同发育阶段的表达水平
        3.2.3 MdPGRP-LE基因在不同细菌刺激下的表达水平
    3.3 家蝇幼虫干扰检测及干扰后功能分析
        3.3.1 MdPGRP-LE基因干扰效果检测
        3.3.2 MdPGRP-LE基因敲低后家蝇幼虫肠道中pGFP-ECO的荧光检测.
        3.3.3 MdPGRP-LE基因敲低对转录因子及抗菌肽表达的影响
        3.3.4 MdPGRP-LE基因敲低后酚氧化物酶活性的测定
        3.3.5 MdPGRP-LE基因敲低并细菌刺激对转录因子及抗菌肽表达的影响
        3.3.6 MdPGRP-LE基因敲低(并细菌刺激后)对家蝇幼虫存活率的影响
    3.4 MdPGRP-LE基因的原核表达及蛋白纯化
    3.5 rMdPGRP-LE与细菌结合活性检测
    3.6 rMdPGRP-LE与多糖结合活性检测
    3.7 rMdPGRP-LE与细菌凝集活性检测
    3.8 rMdPGRP-LE酰胺酶活性检测
    3.9 rMdPGRP-LE抗菌活性检测
第四章 讨论
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
硕士期间发表论文情况



本文编号：3867943