肾脏过表达GJB1基因动物模型的构建

发布时间：2023-12-24 12:28

　　目的构建小鼠过表达GJB1基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,建立一种小鼠肾脏过表达GJB1基因的动物模型。方法采用PCR扩增制备小鼠GJB1基因片段,利用基因重组技术构建含GJB1基因的重组质粒,将携带小鼠GJB1基因的腺相关病毒(AAV)穿梭质粒与pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞,通过选择培养基筛选出同源重组的阳性克隆获得rAAV。将30只成年C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组各6只(W1组、W2组、W3组、W4组及空白对照组),经尾静脉将rAAV注射到W1～W4组小鼠体内,分别于注射后1周、2周、3周、4周取其心脏、肝脏、肾脏组织行PCR检测GJB1 mRNA的表达情况,并经石蜡包埋切片后采用免疫组织化学法检测Cx32的表达。结果含GJB1基因的rAAV被成功构建。随着注射后时间的延长,小鼠肾脏组织GJB1基因转录及Cx32蛋白表达强度均逐渐增强,与空白对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05),而其他器官(肝脏、心脏)GJB1基因表达未见明显增强(P均> 0.05)。结论采用rAAV技术可成功构建肾脏过表达GJB1基因的小鼠模型,这对深入...

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【文章目录】：
材料与方法
    一、材料
        1. 实验动物
        2. 试剂及仪器
    二、方法
        1. r AAV的构建与筛选
        2. GJB1基因过表达AAV载体转染与筛选
        3. AAV病毒的浓缩及纯化
        4. 超滤脱盐及保存
        5. 动物实验分组及处理
    三、统计学处理
结果
    一、GJB1基因r AAV的构建
        1. GJB1基因的克隆合成
        2. GJB1基因r AAV载体构建及测定结果
        3. GJB1基因r AAV包装及浓度测定
    二、GJB1基因在小鼠肾脏表达明显升高
讨论



本文编号：3874510