甜菜M14品系BvM14-Tpx基因克隆及原核表达体系下应答氧化胁迫功能的初步研究

发布时间：2024-02-02 19:36

　　为了研究甜菜M14品系BvM14-Tpx基因的抗氧化功能,本试验以带有野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系M14品系为试验材料,利用RACE技术获得甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶基因(BvM14-Tpx) cDNA全长,对其进行生物信息学分析,利用Real-time PCR和半定量RT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析,在原核表达体系下进行BvM14-Tpx基因应答氧化胁迫研究。生物信息学分析结果表明,BvM14-Tpx基因cDNA全长为1044 bp,包含最大的ORF为489 bp,编码162个氨基酸;含有过氧化物酶Ⅱ(PrxⅡ)型的保守结构域;BvM14-Tpx蛋白与豌豆(Pisum sativum L.)和苜蓿(Medicago truncatula L.)中Tpx蛋白的亲缘性较高。组织特异性表达分析结果表明,BvM14-Tpx基因在甜菜M14品系各组织表达量从高到低的顺序是根、茎、叶、花。通过原核表达体系下BvM14-Tpx基因应答氧化胁迫的研究,表明BvM14-Tpx基因能够提高大肠杆菌对于环境中氧化胁迫的适应能力,减轻H₂O₂

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【部分图文】：

图1甜菜M14品系花、叶、茎、根总RNA的1%琼脂糖凝胶电泳图

图1结果表明，提取总RNA中28SrRNA、18SrRNA、5SrRNA条带清晰，并且28SrRNA条带的亮度约为18SrRNA条带亮度的2倍。说明从甜菜M14品系中提取的总RNA质量较好，具有较好的完整性，可进行后续的反转录实验。2.1.2甜菜M14品系B....

图4BvM14-Tpx基因cDNA全长的1%琼脂糖凝胶电泳图

将3′RACE与5′RACE测序结果进行拼接并设计引物进行PCR扩增。BvM14-Tpx基因cDNA全长条带大小1044bp与预期扩增条带大小一致，进一步通过测序结果，表明成功扩增获得BvM14-Tpx基因cDNA全长（图4）。2.2甜菜M14品系BvM14-Tpx....

图5BvM14-Tpx基因cDNA全长的开放阅读框分析

通过Real-timePCR技术测定甜菜M14品系BvM14-Tpx基因花、叶、茎、根各个组织器官表达量，表明BvM14-Tpx基因在不同组织中的表达量是根>茎>叶>花（图8）。通过半定量RT-PCR技术对BvM14-Tpx基因进行组织特异性表达分析，BvM14-Tpx....

图6BvM14-Tpx蛋白多重序列比对

实验组为转BvM14-Tpx基因BL21(DE3)菌株，对照组为转空载体的BL21(DE3)菌株。在37℃，180r/min条件下，实验组菌株与对照组菌株的生长曲线一致。在3mmol/LH2O2处理条件下，两者的细胞增长数出现较大的差异，实验组比对照组的菌数多且进入对数生....

本文编号：3893051