ATP2B1基因沉默经Ca 2+ /钙调蛋白信号通路促进Akt激活增加HUVEC胰岛素敏感性的实验研究

发布时间：2024-02-03 07:52

　　目的:研究ATP2B1基因沉默对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)胰岛素敏感性的影响,并探讨所涉及的基础机制,寻找增强内皮细胞胰岛素敏感性的方法,为临床上治疗胰岛素抗抵患者的新药研发提供部分理论支持,降低胰岛素抵抗患者发生心血管疾病的风险。方法:将对数生长期的HUVEC细胞用0.25%胰蛋白酶消化计数后按0.5×10 6cells/孔的密度接种在6孔板中,采用riboFECTTMCP转染试剂盒分别将阴性SiRNA(Si-Neg)和ATP2B1基因沉默特异性SiRNA(Si-ATP2B1)转染到HUVEC细胞中,转染浓度均为100nM。此后,实验分三个部分进行干预和指标检测。第一部分,转染48h后,收集细胞,用Western Blot检测HUVEC细胞内质膜钙离子ATP酶-1(Plasma Membrane Calcium ATPase-1,PMCA1)蛋白表达水平、Fluo-3 AM钙离子荧光探针法测定HUVEC细胞内Ca²⁺浓度。第二部分,转染32h后,血清饥饿培养过夜(16h),分别用以...

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血管内皮细胞胰岛素抵抗分子机制研究进展(综述)
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本文编号：3893990